循环miR-221/222在胶质瘤诊断与预后中的价值与基于CED的中枢神经系统线药新方法的研究

摘要

本文主要从以下几个方面进行论述：
　　第一部分:循环miR-221/222在胶质瘤诊断与预后中的价值
　　目的:
　　探讨循环miR-221/222在胶质瘤诊断与预后中的应用价值。
　　方法:
　　1.材料:收集健康人和经病理诊断确诊的胶质瘤病人的静脉血标本各51例与50例。收集对照组与实验组的临床资料如年龄、性别、吸烟史、饮酒史、家族肿瘤史与电离射线暴露史，并持续追踪病人生存情况至实验结束。
　　2.qRT—PCR测定循环miR-221/222在对照组与实验组的相对表达水平。
　　3.统计学分析:采用SPSS19.0软件，采用x2检验确定实验组与对照组在miR-221/222表达上的差异。并绘制受试者工作曲线(ROC)，确定miR-221/222对胶质瘤诊断的敏感性与特异性。Kaplan-Meier法绘制生存曲线，并用log-rank检验进行分析。
　　4.meta分析:通过纳入在PubMed，Embase和Cochrane Library数据库中从2010到2014年间，关于miR-221/222与肿瘤关系的17篇文章中的23个试验，采用STATA12.0与SPSS19.0软件分析循环miR-221/222对肿瘤诊断的价值。
　　结果:
　　1.qRT—PCR显示，胶质瘤病人中循环miR-221/222高表达，与对照组差异有统计学意义(p=0.001)。胶质瘤组病人循环miR-221/222表达高于无瘤健康对照。
　　2.由受试者工作曲线(ROC)计算得出miR-221曲线下面积AUC为0.83(95％CI0.74～0.93)，miR-222曲线下面积为0.88(95％ CI0.79～0.98)。miR-221的cut-off值为1.49，敏感度和特异度为73.5％与80％，miR-222的cut-off值为2.67，敏感度与特异度分别为85.7％与87.5％。
　　3.根据循环miR-221与miR-222相对表达情况分为高表达组与低表达组，Kaplan-Meier生存曲线log-rank法检验表示血浆中miR-221与miR-222高表达与较差的预后之间存在着明显的关系(miR-221: HR=2.40;95％CI，1.42～4.05;miR-222: HR=2.81;95％CI,1.70～4.65)。
　　4.Deek漏斗图（图1-5），p=0.12＞0.05，漏斗图回归直线两侧对称，因此在统计学上可以判定所纳入文献不存在发表偏倚。由于该组分析数据I2＞50％, P＜0.1(I2 sensitivity=73.34％,95％ CI:62.36～84.32％, P＜0.01; I2 specialtivity=69.16％,95％ CI:55.96～82.36，P＜0.01)，可以认为所纳入的研究有中度以上的异质性，采用随机效应模型（random effects model）对本组数据进行分析。计算得合并敏感度(pooled sensitivity)为0.76(95％ CI:0.70～0.80)，合并特异度(pooled specificity)为0.75(95％ CI:0.69～0.80)，阳性似然比(positive like ratio)为3.00(95％CI:2.30～3.90)，阴性似然比(negative like ratio)为0.33(95％ CI:0.26～0.42)，诊断优势比(diagnostic odds ratio)为9.0(95％ CI:6.0～15.0)。因此可认为，miR-221/222对肿瘤的诊断有重要提示价值。
　　针对miR-221，绘制汇总受试者工作曲线(sROC)，计算得合并敏感度为0.76(95％ CI:0.66～0.83)，合并特异度为0.74(95％ CI:0.66～0.81)，AUC为0.82。对于miR-222，由sROC得合并敏感度为0.76(95％ CI:0.66～0.83)，合并特异度为0.76(95％ CI:0.66～0.83), AUC为0.82。
　　结论:
　　1.本部分实验成功的检测了胶质瘤患者与健康无瘤对照的循环miR-221/222相对表达水平。
　　2.循环miR-221/222表达水平可以用于区分胶质瘤与正常无瘤对照，胶质瘤病人的循环miR-221/222表达水平明显高于健康人。
　　3.循环miR-221/222表达水平可以用来预测胶质瘤患者的预后，高表达者预后较差。
　　第二部分:基于CED的中枢神经系统局部给药新技术的研究
　　目的:
　　(1)探讨造成CED颅内留置管阻塞的原因，
　　(2)建立新的CED手术体系，实现在脑不同部位的精确置管并安全长期给药。
　　(3)建立新的CED手术体系，保持留置管长期畅通。
　　方法:
　　(1)体外试验:导管阻塞验证实验验证在CED颅内留置管置入过程中，脑组织可被吸入造成留置管阻塞。影响因素验证试验采用与试验中相同的手术步骤，分别采用干燥实芯（空芯）导丝与无菌PBS浸润过的实芯（空芯）导丝，采用正常与慢速两种导丝推出速度，记录留置管内的负压的变化，寻找影响留置管内负压变化的因素。
　　体内试验:
　　1.根据术前磁共振，确定置管位置。
　　2.改进CED置管手术步骤，在壳核、黑质等部位置管。
　　3.手术后立即进行磁共振检查，确认置管位置，计算置管精确度、检查留置管腔是否通畅。
　　4.给予不同的药物、采用不同的给药模式和给药速度进行CED颅内给药。
　　5.21天～90天后，行颅脑磁共振，评估药物扩布情况并计算留置管便宜角度安乐死动物，检查留置管是否畅通。
　　6.免疫组织化学检测置管对脑组织造成的损伤情况。
　　结果:
　　1.导管阻塞验证实验证实:采用实芯导丝介导颅内留置管置入，脑组织的确可以被吸入留置管针孔内造成药物流出道阻塞，但是除非是采用极速退出实芯导丝(43.2mm/min)，被吸入的脑组织量并不足以完全堵塞导管流出道。因此，我们的前期猜测即吸入导管针孔药物流出道的脑组织可能继续生长直至导管完全阻塞是完全有可能的。
　　导管阻塞影响因素验证实验证实:(1)单独使用空芯导丝介导颅内留置管置入并不能消除移除导丝时产生的负压;(2)当导丝与颅内留置管被润湿后，负压值可能增大，甚至达到以前的两倍;(3)减慢导丝撤出的速度，是降低管内负压的有效方法。
　　2.所有动物对置管过程以及长期带管生存耐受良好。所有动物无任何感染及异常表现，无神经功能缺损表现。所有动物进食进水如常。所有动物体重变化均保持在3.4％以内。
　　3.111个颅内留置管平均置管误差为0.86±0.61mm。置管漂移角度:矢状位平均漂移为3.0±2.61°，冠状位平均漂移为2.6+2.41°。所有CED颅内留置管，都精确的置入指定位置，经过长时程CED局部给药后，位置未发生明显变化
　　4.111个颅内留置管，经过不同时长（21～90天）的不同给药时长，采用不同的给药模式与给药速度，成功的将药物送到了指定靶点，所有留置管保持通畅，管腔通畅率达到了100％。
　　5.免疫组化显示(1)所有组织学切片中可见1mm左右的针道，针尖部位均位于解剖学指定部位;(2)沿针道及针尖周围可见部分单核细胞浸润;(3)针尖部周围见大量细胞外液浸润现象，在局部药物扩布区可见少量血管周炎性细胞浸润;(4) Nissl染色示沿针道及针尖周围微量神经细胞缺失现象，未见明显的成簇的细胞群缺失。
　　结论:
　　1.本实验成功的鉴定了CED局部给药的过程中，颅内留置管阻塞的原因。
　　2.本实验证明了采用新的CED手术体系，可以实现安全长期精确的CED局部给药。
　　3.本实验证明了新的CED手术体系，可以长期保持颅内留置管通畅。

目录

声明

摘要

符号说明

第一部分：循环miR221／222在胶质瘤诊断与预后中的价值

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

附图

第二部分：基于CED的中枢神经系统局部给药新技术的研究

前言

实验材料与方法

实验结果

讨论

结论

附图表

英文综述

参考文献

发表文章

攻读博士学位期间发表的学术论文

致谢