扩张型心肌病差异蛋白表达及蛋白生物标志物研究

摘要

扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy，DCM)是原发性心肌病(primary cardiomyopathy，PCM)中最常见的一种类型，其病因和发病机制尚不明确，主要特征为左心室（多数）和（或）右心室扩大和心肌收缩功能障碍，伴或不伴有心律失常、充血性心力衰竭，可并发栓塞甚至猝死等[1-7]，是导致慢性心力衰竭的主要病因之一。有文献报道，在我国DCM的发病率为13/10万～84/10万，男性多于女性(2.5∶1)，其中，家族性扩张型心肌病(family dilatedcardiomyopathy，FDCM)占2.25％～8.8％[5]，发病以青壮年较为多见，65岁以上老年人发病率为1％[7]。DCM患者如能及时得到诊断治疗，患者将在很大程度上减少相应的医疗费用以及致命性事件的发生。然而，由于DCM仍缺乏特异性的诊断指标，截至目前，DCM的早期诊断仍缺乏敏感特异、方便快捷的诊断方法，其诊断主要根据患者的临床表现以及X线检查、心电图(electrocardiogram，ECG)检查、超声心动图检查等相关辅助检查等情况，做出的排除性诊断，即需要排除风湿性心脏病、高血压性心脏病、继发性心肌病、冠心病、先天性心脏病、心肌炎、克山病(Keshan disease，KD)等有关疾病后才能诊断DCM。
　　近年来，蛋白质组学领域的研究取得了突飞猛进的发展，技术日趋成熟[8-10]。目前，通过应用蛋白质组学相关技术已在肿瘤[11-13]、骨关节病[14-15]等患者的组织液和组织中寻找到相应的蛋白生物标志物，为肿瘤、骨关节病等相关疾病的诊断和鉴别诊断提供了准确可靠、方便快捷的新方法。然而，迄今为止，还没有利用新近发展的蛋白质组学技术从DCM、KD等心肌病患者血清中寻找到相关的血清蛋白生物标志物的准确报道。为此，我们进行了DCM患者、KD患者以及健康人血清蛋白生物标志物的研究，期望通过应用蛋白质组学技术，筛选出DCM的血清蛋白生物标志物，建立DCM诊断以及鉴别诊断的判别模型。
　　目的:
　　通过应用蛋白质组学技术寻找DCM血清蛋白生物标志物，建立DCM诊断以及鉴别诊断的判别模型，为DCM的诊断、鉴别诊断，提供新的、方便快捷的方法，为DCM的早期发现、早期预防、早期诊断以及早期治疗开拓新的途径。
　　方法:
　　选择在山东大学齐鲁医院、济南市中心医院和济南市第一人民医院心内科住院的29例DCM患者作为DCM组;选择内蒙古、山东及四川等3省份（自治区）KD病区的32例慢型KD患者作为KD组;并以济南市当地健康人30例作为健康对照组。取受检者血清，应用液体芯片飞行时间质谱技术(ClinProtTM MALDI-TOF-MS)检测受检者血清差异蛋白，使用ClinProTools2.2获取蛋白峰数据，并采用遗传、快速分类和神经网络等3种算法筛选血清生物标志物，建立ClinPrott判别模型。
　　结果:
　　①经检测DCM组、健康对照组2组受试对象的血清样本，共获得蛋白质/多肽有效峰图73个，其中有57个差异蛋白/多肽，与健康对照组比较，DCM组有35个差异蛋白/多肽上调，22个差异蛋白/多肽下调。筛选出质荷比(mass-to-charge ratio, m/z)值为4247.95、4209.37、1058.69、1074.78、2364.71的5个蛋白质/多肽作为血清生物标志物，经验证ClinPrott判别模型的敏感性与特异性分别为99.14％、99.16％。
　　②经检测DCM组、KD组等2组受试对象的血清样本，共获得蛋白质/多肽有效峰图61个，其中有49个差异蛋白/多肽，与KD组比较，DCM组有22个差异蛋白/多肽上调，27个差异蛋白/多肽下调。筛选出质荷比(m/z)值为4049.27、3947.99、7927.06、1450.35、5917.11的5个蛋白质/多肽作为血清生物标志物，经验证ClinPrott判别模型的敏感性与特异性分别为99.17％、99.19％。
　　结论:
　　①DCM患者与健康人群比较，DCM患者血清蛋白差异表达;筛选出的质荷比(m/z)为4247.95、4209.37、1058.69、1074.78、2364.71的蛋白质是DCM的血清蛋白生物标志物，构建的诊断模型能将DCM患者与健康人区分开。
　　②DCM患者与KD患者比较，DCM患者血清蛋白差异表达;筛选出的质荷比(m/z)为4049.27、3947.99、7927.06、1450.35、5917.11的蛋白质是DCM的血清蛋白生物标志物，构建的鉴别诊断模型能将DCM患者与KD患者区分开。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

资料与方法

1．一般资料

2．研究方法

3．实验设计

4．受试对象临床特点

结果

1．差异蛋白／多肽检测结果

2．ClinPrott判别模型建立及敏感性与特异性验证结果

讨论

结论

参考文献

文献综述 扩张型心肌病病因、诊断及治疗研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文