下调RbAp48表达抑制子宫内膜腺癌细胞增殖、侵袭、迁移

摘要

研究背景:
　　子宫体癌常常被称做子宫内膜癌，可发生于任何年龄段，但以围绝经期及绝经后中老年女性多见。典型表现多为:无明显诱因出现经期延长、经量增多、绝经后异常阴道流血或者分泌物增多，是女性常见的恶性生殖系统肿瘤之一。近几年来，发病率逐年上升，严重威胁女性生命。子宫内膜癌分很多亚型，如腺癌、浆液性乳头状癌、透明细胞癌以及未分化癌等，其最常见亚型是腺癌，约占发病率的80％-90％，与自然环境、家族遗传、腹型肥胖、Ⅱ型糖尿病、绝经晚、初潮早、卵巢癌病史、不恰当使用雌/孕激素及不孕等多种因素相关。目前对早期病人治疗方法主要是手术及化疗、放疗，病人5年生存率较高，而对晚期病人治疗比较困难，多采用姑息治疗，病人预后往往很差，5年生存率低。因此关于子宫内膜癌的早期诊断、新的治疗途径、治疗靶点及靶向治疗药物的摸索仍在持续进行。
　　PcG（多梳蛋白polycomb group）蛋白是调控生长发育的重要转录因子，最早在果蝇中被发现，在物种间高度保守。PcG蛋白可以分为两个核心蛋白复合体:Polycomb抑制复合体1(PRC1)和Polycomb抑制复合体2(PRC2)。PRC1含有至少10个蛋白亚基，如RING1A/1B、BMI1; PRC2则由EZH2、RbAp48、SUZ12和EED四个蛋白亚基组成。
　　视网膜母细胞瘤结合蛋白48(Retinoblastoma associated protein-48，RbAp48)作为PRC2亚基中一个亚单位，是WD-40家族中的一员，在植物和动物中相对保守，主要由CAF-1复合体、E(Z)复合体、NURF复合体、NuRD复合体、SIN3复合体、核蛋白等组成。近些年来，某些资料表明RbAp48在宫颈癌、肺癌、乳腺癌、结直肠癌、肝癌、恶性血液病、人获得性免疫缺陷综合征等多种恶性肿瘤中获得广泛研究并在其中承担重要生物学作用。有研究表明:RbAp48主要功能是促进肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移，但是其抑制肿瘤细胞侵袭、迁移及增殖能力也有相关报道。但是，目前关于RbAp48在子宫内膜腺癌中的作用及其发挥作用机制的研究尚未见相关报道。
　　研究目的:
　　本文旨在探讨RbAp48在正常子宫内膜组织（增生期、分泌期、绝经期）、子宫内膜不典型增生组织及不同分化程度的子宫内膜腺癌组织（高、中、低分化）中的表达情况，是否有表达差异;分析子宫内膜腺癌组织中RbAp48的表达与某些临床病理特性的关系;进一步探讨下调RbAp48表达对子宫内膜腺癌KLE、HEC1A细胞系增殖、侵袭、迁移能力的影响，探求子宫内膜腺癌治疗的新型潜在分子靶点，为下一步临床治疗打下坚实理论基础。
　　研究方法:
　　1、采集合适的子宫内膜组织标本，采用免疫组织化学法分析:72例正常子宫内膜组织（增生期21例、分泌期27例、绝经期24例），27例子宫内膜不典型增生组织，52例不同分化水平的子宫内膜腺癌组织中RbAp48蛋白的表达情况。
　　2、分析某些临床病理特性与子宫内膜腺癌组织中RbAp48表达是否有相关性。
　　3、采取慢病毒来下调RbAp48基因在子宫内膜腺癌KLE、HEC1A细胞系中的表达，RbAp48蛋白表达情况的检测用Western Blotting法，效率最高的一组则被选中做下一步实验。
　　4、在体外，平板克隆形成实验、CCK8实验、Transwell侵袭及迁移实验用来观察下调RbAp48表达对子宫内膜腺癌KLE、HEC1A细胞系功能的影响。
　　5、采用SPSS16.0软件对数据进行统计分析。分析正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生组织与子宫内膜腺癌组织中RbAp48蛋白的表达及子宫内膜腺癌中RbAp48表达与临床病理特性关系:Pearson卡方检验或者Fisher精确检验;细胞功能学实验:Student's T-test。数据来自至少三次的独立实验，并均以mean±SD（均值±标准差）表示。差异有统计学意义:P＜0.05。
　　结果:
　　1、RbAp48蛋白在正常子宫内膜组织（增生期、分泌期、绝经期）和子宫内膜不典型增生组织中表达较低。RbAp48蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达高于正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生组织，RbAp48蛋白在低分化腺癌的表达高于高分化腺癌和中分化腺癌。
　　2、数据分析表明:FIGO分期、远处转移、孕激素服用史、肌层浸润深度以及肥胖、糖尿病与子宫内膜腺癌组织中RbAp48蛋白的表达有关(P＜0.01，P＜0.05);而年龄、月经初潮、痛经、体质量指数(BMI)、盆腔淋巴结转移、淋巴血管间隙受累与其无关(P＞0.05)。
　　3、在体外，下调RbAp48表达后子宫内膜腺癌KLE、HEC1A细胞系的增殖、迁移及侵袭能力显著下降(P＜0.05)。
　　结论:
　　在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生组织及子宫内膜腺癌组织中RbAp48蛋白均有基础表达，RbAp48在子宫内膜腺癌组织中表达显著上调暗示其可能在子宫内膜腺癌的发病中扮演重要角色。在体外，下调RbAp48表达可以抑制子宫内膜腺癌KLE、HEC1A细胞系增殖、侵袭及迁移能力。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

一、实验材料

二、实验方法及步骤

三、统计学处理

结果

1、RbAp48蛋白在不同子宫内膜组织中的表达情况

2、子宫内膜腺癌组织中RbAp48蛋白的表达与部分临床病理特性的关系

3、采用吉凯基因合成的慢病毒序列(Lentivirus)干扰RbAp48蛋白的表达

4、在体外，下调RbAp48蛋白表达可抑制子宫内膜腺癌细胞增殖能力

5、在体外，下调RbAp48蛋白表达可抑制子宫内膜腺癌细胞侵袭、迁移能力

讨论

结论

附图表

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文目录