声明
第一章 综述
1.1 前言
1.2 谷胱甘肽硫转移酶的概述
1.2.1 谷胱甘肽硫转移酶的功能
1.2.2 谷胱甘肽硫转移酶的分类
1.2.3谷胱甘肽硫转移酶的研究
1.3 超氧化物歧化酶基因研究现状
1.3.1 SOD的功能和种类
1.3.2 SOD的物理和化学性质
1.3.3 SOD酶活性的影响因素
1.3.4 SOD与抗氧化、抗衰老
1.3.5 SOD在化妆品中的应用
1.4 微囊藻毒素
1.5 本研究的目的与意义
第二章 褶纹冠蚌GST和MnSOD基因的表达与功能分析
2.1 前言
2.2 实验材料
2.3 菌株和质粒
2.4 仪器设备及试剂
2.4.1 实验仪器
2.4.2 实验试剂与试剂盒
2.5引物表
2.6 实验方法
2.6.1总RNA的提取
2.6.2 SMART cDNA的合成
2.6.3 CpMnSOD和CpGST5基因的克隆
2.6.4 CpMnSOD和CpGST5基因的生物信息学分析
2.6.5 RT-qPCR检测CpMnSOD和CpGST5基因的表达水平
2.6.6 pColdI-ZZ-CpMnSOD和 CpGST5重组质粒的构建
2.6.7 pColdI-ZZ-CpMnSOD和pET32-CpGST5在大肠杆菌中的小量诱导
2.6.8 重组蛋白的纯化及浓度测定
2.6.9 CpMnSOD酶活性的测定
2.6.10 温度、pH、变性剂对CpMnSOD蛋白活性的影响
2.6.11 褶纹冠蚌CpMnSOD基因启动子的克隆
2.7结果
2.7.1 总RNA 的提取
2.7.2 褶纹冠蚌GST5基因的克隆
2.7.3 CpGST5基因cDNA序列及推导氨基酸序列分析
2.7.4 CpGST5氨基酸推导序列的同源性比对
2.7.5 GST5基因系统进化分析
2.7.6 CpGST5基因的组织表达
2.7.7 蚌经微囊藻毒素和生理盐水刺激后CpGST5基因的表达变化
2.7.8 CpGST5基因的原核表达及纯化
2.7.9褶纹冠蚌MnSOD基因的克隆
2.7.10 CpMnSOD基因cDNA序列及推导氨基酸序列分析
2.7.11 CpMnSOD氨基酸推导序列的同源性比对
2.7.12 MnSOD基因系统进化分析
2.7.13 CpMnSOD基因的组织表达
2.7.14 微囊藻毒素和生理盐水刺激后CpMnSOD基因的表达变化
2.7.15 CpMnSOD基因的原核表达及纯化
2.7.16 测定融合蛋白的浓度
2.7.17 温度、pH、变性剂对CpMnSOD蛋白活性的影响
2.7.18 CpMnSOD 启动子序列分析
2.8 讨论
第三章 结论与展望
3.1.1 主要结论
3.1.2 创新点
3.1.3 研究展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
