脓毒症后CD8+T细胞高表达Tim-3诱发免疫紊乱

摘要

目的：
　　脓毒症是指多致病因素引起的各组织、器官的过度炎症反应，可以继发严重的感染或伴有难治性休克。从长时间的统计数据来看，严重感染的和伴有难治性休克的患者是重度、复杂的创伤人群主要的死亡原因之一。该疾病的发展前期人体会大量分泌炎性细胞因子，继续发展变化则发生免疫抑制、紊乱，诱发大部分免疫相关的生物分子程序性死亡。Tim-3是T细胞免疫球蛋白黏蛋白家族中的一个，对机体的免疫应答反应具有抑制调节作用，可以调控T细胞的凋亡和免疫耐受；最早在小鼠的CD4+Th1细胞表面发现该蛋白，并具有特异性；其在固有免疫和适应性免疫反应中发挥着重大功能。CD8+T人体内的一个亚淋巴细胞群，其主要参与调节清除病毒感染的细胞和肿瘤细胞。但是目前关于CD8+T和Tim-3在脓毒症诱导的免疫紊乱中所起作用的研究还较少。因此，本课题观察了 Tim-3在脓毒症小鼠脾脏 CD8+T及脓毒症患者外周血中CD8+T细胞表面的表达情况，脓毒症后CD8+T数量改变与Tim-3表达间的关系；CD8+T功能的变化与Tim-3表达间的相互关系。
　　方法：
　　1、采集脓毒症病人的血液作为实验标本，健康成人的血液作为对照实验标本；通过流式细胞术检测脓毒症病人静脉血CD8+ T细胞Tim-3表达情况；
　　2、建立脓毒症传统的小鼠模型——盲肠结扎穿孔术(CLP)，对照组采用假手术处理，其仅予以麻醉及开腹并予以关闭腹腔，对盲肠不予以结扎及穿孔。并于CLP术后2h、6h、12h、24h、36h及48h获取小鼠脾脏，通过流式细胞术检测脓毒症小鼠及假手术组小鼠脾脏CD8+ T细胞Tim-3表达情况及Tim-3+CD8+T和Tim-3-CD8+T细胞功能状态。
　　结果:
　　一、脓毒症后CD8+T细胞数量改变与Tim-3表达之间的关系：
　　A、脓毒症后12小时开始，CLP组小鼠的脾脏CD8+T细胞总数显著低于对照组（假手术组）的小鼠。
　　B、脓毒症后24小时，CLP组小鼠的脾脏CD8+T细胞的凋亡显著高于对照组（假手术组）的小鼠。
　　C、1、CLP组小鼠的脾脏CD8+T表达Tim-3蛋白显著高于对照组（假手术组）。
　　2、Tim-3+CD8+T细胞亚群的凋亡发生率显著高于Tim-3-CD8+T细胞亚群。
　　D、脓毒症后24小时CD8+T表达Tim-3蛋白与其自身的凋亡成正相关。
　　二、脓毒症后CD8+T细胞的功能改变及与Tim-3表达间的关系：
　　A、Tim-3+CD8+T细胞趋向于分泌更少的Th1细胞因子（IFN-γ，IL-2,TNF-α）
　　B、Tim-3+CD8+T细胞趋向于分泌更多的抑炎因子（IL-10）。
　　C、脓毒症后Tim-3+CD8+T细胞趋向于表达更多的死亡蛋白PD-1。
　　三、脓毒症患者外周血CD8+ T细胞表达Tim-3的比例较健康对照组增高。
　　结论：
　　脓毒症后患者外周血CD8+T细胞及盲肠结扎穿孔术(CLP)小鼠的脾脏CD8+T细胞12小时起细胞总数显著降低，24小时起细胞凋亡增多，表达的Tim-3蛋白显著增高，其中Tim-3+CD8+T细胞亚群的凋亡发生率显著高于Tim-3-CD8+T细胞亚群，CD8+T细胞表达Tim-3与其细胞凋亡呈正相关。Tim-3+CD8+T细胞趋向于分泌更少的Th1细胞因子（IFN-γ，IL-2,TNF-α）及分泌更多的抑炎因子（IL-10），表达更多的死亡蛋白PD-1。说明CD8+T细胞表面高表达Tim-3蛋白诱发了脓毒症后机体的免疫紊乱。

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英文略缩词表

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前言

材料和方法

一、外周血样本资料

二、实验动物

三、实验材料

四、主要实验仪器

五、实验方法

结果

一.脓毒症后CD8+T细胞数量改变与Tim-3表达之间的关系

二.脓毒症后CD8+T细胞的功能改变及与Tim-3表达间的关系

三、脓毒症患者外周血CD8+T细胞表面Tim-3的表达情况

讨论

参考文献

文献综述: 脓毒症后CD8+T高表达Tim-3诱发了免疫紊乱

致谢