休克肠淋巴液对小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞增殖与活化的影响

摘要

背景:重症休克后存在着明显的免疫功能紊乱，尤其是CD4+T淋巴细胞介导的细胞免疫反应，在重症休克导致全身炎症反应综合征（systemicinflammatory response syndrome，SIRS）及多器官功能障碍综合征(multipleorgan dysfunction syndrome，MODS)的发生、发展中发挥着重要作用。失血性休克后的肠淋巴液回流是休克和恶化的主要因素之一。失血性休克T细胞介导的免疫反应紊乱与肠淋巴液回流的关系，值得研究。
　　目的:本研究旨在观察小鼠失血性休克后不同时期肠淋巴液对正常小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞增殖以及干扰素(interferon，IFN-γ)、白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）、白细胞介素4(interleukin-4，IL-4)和肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(tumor necrosis factorα induced protein8 like2，TIPE2)等细胞因子含量的影响，进一步探讨肠淋巴液回流在失血性休克后免疫功能紊乱中的作用。
　　方法:应用健康SPF级雄性BALB/C小鼠，复制失血性休克模型，常规方法引流休克期肠淋巴液(休克即刻至1h，post-shock mesentericlymph(PSML)）、休克复苏后肠淋巴液(休克复苏后至3h，post-shock withresuscitation mesenteric lymph(PSRML)）;同时引流正常小鼠的肠淋巴液（1h，normal mesenteric lymph(NML)）。应用免疫磁珠方法分选获取正常小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞后，分别与4％终浓度的肠淋巴液共孵育。实验分为NML组、PSML组、PSRML组和空白对照组（control）;每组又根据刺激时间分为3h、6h、12 h和24 h四个亚组。MTT方法检测不同时期肠淋巴液对CD4+T细胞增殖程度的影响;同时，留取培养上清，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测培养上清中IFN-γ、IL-2、 IL-4和TIPE2的含量。
　　结果:①CD4+T淋巴细胞增殖情况:NML能够明显促进CD4+T淋巴细胞增殖;PSML早期能够促进CD4+T淋巴细胞增殖，但较正常淋巴液作用弱，后期抑制CD4+T淋巴细胞增殖;PSRML早期对CD4+T淋巴细胞增殖无明显作用，后期可刺激CD4+T淋巴细胞增殖，但仍低于NML组。②IL-2含量变化:与对照组比较，NML组培养上清中IL-2水平明显升高，且随着刺激时间延长IL-2水平呈现增高趋势;PSML作用早期IL-2水平明显增高，后期下降;PSRML作用6h和24 h明显增高。与NML组比较，PSML作用12 h时，IL-2水平高于NML组，作用24 h时明显降低，PSRML组作用后期IL-2水平较NML组显著降低;与PSML组比较，PSRML组作用12h时IL-2水平较PSML组降低，而作用24 h时IL-2水平较PSML组增高。③IL-4含量的变化:与control组比较，NML组IL-4的水平呈现降低趋势;PSML组及PSRML组IL-4水平呈现先降低后增高趋势;与NML组比较，PSML组及PSRML组IL-4水平随着时间延长呈现先降低后增高趋势;与PSML组比较，PSRML组IL-4水平于作用24 h明显降低。④IFN-γ含量的变化:与control组比较，NML组IFN-γ水平明显增高，且随着刺激时间延长不断增高;PSML刺激6h、12 h IFN-γ水平显著性升高，刺激24 h时IFN-γ水平降低;PSRML刺激24 h IFN-γ水平升高;与NML组比较，PSML刺激3h及24 hIFN-γ水平降低，PSRML刺激后各时间点IFN-γ水平均呈现降低趋势;与PSML组比较，PSRML刺激6h、12 h IFN-γ水平降低，刺激24 h时IFN-γ水平明显增高。⑤TIPE2含量的变化:与control组比较，NML组在作用后6h及24 h TIPE2水平呈现增高趋势;PSML组TIPE2水平于作用后12 h降低，其余各时间点均升高;PSRML组TIPE2水平在刺激24 h时呈现增高趋势;与NML组比较，TIPE2水平在PSML刺激早期无明显变化，后期呈现降低趋势，PSRML组TIPE2水平于6h及24 h降低;与PSML组比较，PSRML作用6h时TIPE2水平降低，结果显示细胞培养上清中的TIPE2水平与CD4+T细胞增殖程度呈现出正相关趋势。
　　结论:休克肠淋巴液与小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的增殖与活化有关。结果提示，肠淋巴液回流参与了失血性休克后细胞免疫功能紊乱介导的炎症反应失控，其机制还有待进一步研究。

目录

声明

摘要

前言

材料与方法

1 主要仪器设备

2 主要材料及试剂

3 实验动物

4 不同时期肠淋巴液的留取

5 CD4+T淋巴细胞分选及纯度鉴定

6 MTT法观察CD4+T细胞增殖程度

7 酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定上清液中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和TIPE2含量

8 统计学处理

结果

1 CD4+T淋巴细胞纯度结果

2 不同时期肠淋巴液对小鼠脾脏CD4+T细胞增殖程度的影响

3 不同时期肠淋巴液对小鼠脾脏CD4+T细胞培养上清中IL-2、IL-4、IFN-γ和TIPE2的影响

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 CD4+T细胞介导的细胞免疫应答及在休克发病学中作用的某些研究进展

致谢