糖原贮积症Ⅰa型1个家系的基因诊断的研究；X-连锁隐性遗传鱼鳞病患者的STS基因分析

摘要

糖原贮积症为一组糖原代谢障碍性疾病，其中Ⅰ型约占25％，而Ⅰ型中Ⅰa型约占80％，故糖原贮积症Ⅰa型(GSDⅠa，MIM＃232200)是糖原贮积症中较为常见的一种，其活产儿患病率为1/(100000～300000)。GSDⅠa典型的临床表现为低血糖，肝脏肿大，生长落后和出血倾向，并可伴有高脂血症，高尿酸血症，高乳酸血症，其长期的并发症可有痛风，转移倾向的肝脏腺瘤，肾功能不全，骨质疏松等。 GSDⅠa是一种由于先天性葡萄糖—6-磷酸酶(G6Pase)缺陷所导致的常染色体隐性遗传的代谢性疾病，G6Pase是糖原分解和葡萄糖生成过程中的关键酶，主要在肝脏、肾脏和小肠中表达，对维持正常血糖水平发挥重要作用。G6Pase基因定位于17q2.1，约长12.5kb，包含5个外显子。研究发现在不同的种族和地理来源的人群中有几种常见的突变类型，如p．R83C和p．Q347X突变在白种人中最常见，c．727G>T突变在日本人中最常见，c．727G>T和p．R83H突变在中国台湾人中最常见。 目前，GSDⅠa型无特殊疗法，基因治疗尚在探索研究中．很多患儿在成年前死亡。由于G6Pase仅在肝脏、肾脏和小肠中表达，以往临床诊断的证实常需进行肝脏组织G6Pase活性测定，因肝穿刺为有创性检查在临床上难以被病人所接受。而早期的正确诊断和及时、合理的饮食治疗可使患儿获得正常的生长发育，对预后有重要作用。故开展无创性、快速而准确的基因诊断极为重要。临床上对疑为GSDⅠa型患者和高危携带者可通过直接检测突变的方式做出诊断。所以检测致病突变基因，对指导早期做好预防工作和为产前诊断及预测提供依据具有很重要的意义。 实验材料： 本文标本来源于广东的一个三口之家，女童经广州市某医院临床诊断，确诊为GSDⅠa型的患者，其父母没有临床症状。经知情同意后，抽取三人外周静脉血3-5ml。用常规的酚氯仿法和试剂盒提取三人的基因组DNA。 实验方法： 联合应用聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)和变性高效液相色谱(denaturinghighperformanceliquidchromatography，DHPLC)及DNA测序技术对所有被检样本进行G6Pase基因5个外显子突变的检测。 实验结果： DHPLC和DNA测序结果均显示，这名女童的父亲是G6Pase第2外显子c．327G>A(p．R83H)突变的杂合子，母亲是G6Pase第4外显子c．597T>C(p．L173P)突变的杂合子，而这名女童是以上两个位点的复合杂合子。 结论： (1)我们在国内首次将DHPLC应用于GSDⅠa型的筛查和G6Pase基因突变的检测。DHPLC检测是一种准确、灵敏、经济、高通量的检测基因变异的方法。可检测出非常见的突变及未报道的突变。 (2)本实验中发现的两种突变是c．327G>A(p．R83H)和c．597T>C(p．L173P)，其中p．L173P不是中国人最常见的突变。研究对象中，父母分别是p．R83H和p．L173P突变的杂合子，而女儿是以上两种突变的复合杂合子。其父母并非是近亲结婚，却分别是一种不同位点突变的携带者，而他们把各自的突变遗传给女儿，其概率是1/4。

目录

文摘

英文文摘

声明

糖原累积病Ⅰа型1个型家系的基因诊断的研究

前 言

第1章 实验材料

1.1研究对象

1.2主要试剂

1.3主要实验仪器

第2章 实验方法

2.1 DNA的提取

2.2 PCR扩增

2.3 DHPLC分析

2.4测序

第3章 实验结果

3.1 DHPLC检测结果

3.2 DNA测序结果

第四章 讨 论

4.1 DHPLC筛查GSDIa型及检测G6pase基因突变的意义

4.2 DHPLC检测与其他分子学方法的比较

第五章 结 论

参考文献

X-连锁隐性遗传鱼鳞病患者的STS基因分析

前言

第1章实验材料

1.1研究对象

1.2主要试剂

1.3主要实验仪器

第2章实验方法

2.1DNA的提取

2.2PCR扩增

第3章实验结果

3.1PCR产物的琼脂糖电泳分析

3.2断裂点的定位

第4章讨论

4.1STS基因缺失断裂点的初步定位

4.2STS基因缺失断裂点与国外研究结果的比较分析

4.3建立Gap-PCR技术确定基因缺失的断裂点

第5章结论

参考文献

致谢