氨氯地平和缬沙坦对人冠脉内皮细胞NADPH氧化酶亚基gp91phox和p22phox表达的影响

摘要

目的：研究不同浓度的氨氯地平和缬沙坦对人冠状动脉内皮细胞（HCAEC）内尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( NADPH)氧化酶亚基gp91phox和p22phox的影响。
　　方法：取体外培养的3~10代之内的人冠脉内皮细胞，以1×105个/ml的密度接种到12个直径为100 mm细胞培养皿，予DMEM完全培养液(90％DMEM+10%FBS+青霉素100 U/ml+链霉素100 U/ml)培养。待细胞铺满整个培养皿底面积的80%，随机将细胞分为两组：氨氯地平组，根据所含药物浓度分为对照组、1×10-5mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L6组；缬沙坦组，根据所含药物浓度分为对照组、1×10-4mol/L、1×10-5mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L6组。分别在不同培养皿中加入含相应药物浓度1%FBS的完全培养液，对照组加入与实验组相同体积不含药物的1%FBS完全培养基，培养24 h后，收取细胞。根据膜蛋白提取试剂盒使用说明提取膜蛋白，用 Bradford法测定膜蛋白浓度，用Western blot法测定不同药物浓度细胞膜中p22phox和gp91phox水平。Western blot结果目的条带应用软件Photoshop进行灰度分析计算。应用统计软件SPSS13.0对数据进行统计分析，多组间样本均数的比较采用单因素方差分析，组间两两比较用SNK-q检验，P<0.05为差异有统计学意义。
　　结果：不同浓度氨氯地平对HCAEC内NADPH氧化酶亚基p22phox表达均有促进作用（P<0.05），高浓度氨氯地平对gp91phox有抑制作用（P<0.05），低浓度则会促进gp91phox的表达（P<0.05）。不同浓度缬沙坦对p22phox与gp91phox的表达均有显著的抑制作用（P<0.05），且有随着药物浓度增高抑制作用增强的趋势（P<0.05）。
　　结论：缬沙坦有抑制氧化应激的效力，并随浓度增高而增强，呈现浓度依赖的趋势；氨氯地平仅在高浓度时抑制部分NADPH氧化酶亚基（gp91phox）的表达，低浓度时反而可能增加氧化应激水平。

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1.引言

2.材料与方法

2.1材料

2.1.1主要仪器

2.1.2 细胞株

2.1.3 主要材料

2.1.4 自配试剂

2.2方法

2.2.1 细胞培养

2.2.2 蛋白质样品制备

2.2.3 Western Blot

2.2.4 统计学处理

3.结果

3.1 氨氯地平对HCAEC膜蛋白p22phox表达的影响

3.2 氨氯地平对HCAEC膜蛋白gp91phox表达的影响

3.3 不同缬沙坦浓度对HCAEC膜蛋白p22phox表达的影响

3.4 不同缬沙坦浓度对HCAEC膜蛋白gp91phox表达的影响

4 讨论

5结论

6不足与展望

参考文献

附录

致谢

综述: 内皮细胞及其与动脉粥样硬化关系的研究进展