钛胶基质整体柱的合成及其在蛋白、肽分离中的应用

摘要

二氧化钛冈其极好的化学稳定性和表面性质被认为是一种新兴的、很有应用前景的HPLC基质。因此,开发钛胶基质的整体色谱柱,并将其用于大批量样品、大分子化合物(如多肽和蛋白等化合物)的分离分析和食品安全检测具有重大意义。本文研究了钛胶基质整体材料的合成以及钛胶柱在分离酪蛋白的胰蛋白酶水解产物中的应用。
　　 本课题的研究包括三个部分:
　　 (1)采用溶胶-凝胶法合成钛胶整体材料,确定了影响整体材料结构和性能的几个因素包括:原料中各成分的比例、加水的速度、浸泡处理、干燥速度的控制。并以GT12,R=16,PEO0.4％的原料比,在严格地控制浸泡处理、干燥速度等过程后,制备出了具有良好外脱和性能的钛胶整体材料。
　　 (2)通过对胰蛋白酶水解酪蛋白条件的单因素实验得出了以下结论:酪蛋白在胰蛋白酶作用下达到最大水解度时的最佳水解条件为:底物浓度为5％,水解温度为55℃,pH值7.5,加酶量为62.44U/g,水解时间为180min,此时,酪蛋白的水解度达到了15.1％。
　　 (3)通过HPLC及LC-MS/MS的研究表明:在采用钛胶柱为色谱分离柱的基础上,以可简单操作的色谱条件:流动相:50％乙腈:50％水；流速:0.5ml/min；进样体积:2μL；柱温为室温,并通过二级质谱确定出了酪蛋白的胰蛋白酶水解产物主要有八种,其中五种是多肽片段,分别为:Val-Leu(β-酪蛋白,162-163)、Gin-Asp-Lys-Ile-His-Pro(β-酪蛋白,46—51)、Gly-Pro-Phe-Pro-Ile(β-酪蛋白,203—207)、Val-Leu—Pro-Val-Pro(β-酪蛋白,170—175)、His-Leu-Pro-Pro-Leu—Leu(β-酪蛋白,134—139),另外三种是氨基酸,分别为Phe、Tyr、Leu。

目录

文摘

英文文摘

第一章 前言

1.1 整体柱研究现状

1.1.1 整体柱研究概况

1.1.2 整体柱的分类

1.1.3 整体柱的制备方法

1.1.4 整体柱结构的评价

1.2 钛胶基质HPLC研究现状

1.2.1 概述

1.2.2 氧化钛的物理化学性质

1.2.3 氧化钛在HPLC中的应用

1.3 酪蛋白及其酶解产物的研究概况

1.3.1 酪蛋白的构成

1.3.2 酪蛋白的研究价值

1.3.3 酪蛋白酶解产物的研究情况

1.4 研究目的及意义

1.5 本课题所要研究的问题

第二章 钛胶基质整体材料的合成及表征

2.1 引言

2.2 实验仪器与材料

2.2.1 主要试剂

2.2.2 主要仪器

2.3 实验方法及结果讨论

2.3.1 钛胶基质整体材料的合成

2.3.2 钛胶基质整体材料的表征

2.4 实验小结

第三章 酪蛋白酶解产物的制备及其HPLC分离

3.1 引言

3.2 实验仪器与材料

3.2.1 主要试剂

3.2.2 主要仪器

3.3 实验方法及结果讨论

3.3.1 酪蛋白酶解条件的研究

3.3.2 Agilent 1200型HPLC对酪蛋白酶解产物的分离

3. 3. 3岛津LC-10AT型HPLC对酪蛋白酶解产物的分离

3.4 实验小结

第四章 LC-MS/MS法确定酪蛋白水解产物的组成

4.1 引言

4.2 实验仪器与材料

4.2.1 主要试剂

4.2.2 主要仪器

4.3 LC-MS/MS法确定酪蛋白水解产物的组成

4.3.1 实验原理

4.3.2 实验方法

4.3.3 实验结果与讨论

4.3.4 实验小结

第五章 结论与展望

参考文献

致谢