徳氏乳杆菌保加利亚亚种NCFB2772胞外多糖的发酵生产及其耐受性研究

摘要

乳酸菌胞外多糖（exopolysaccharide，EPS）因其独特的生理功能和应用价值，已引起国内外诸多学者的关注，并且乳酸菌对人体胃肠液及抗生素的耐受性也一直是学界研究的热点问题。本文选取德氏乳杆菌保加利亚亚种NCFB2772(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus NCFB2772，L.burlgaricusNCFB2772)作为EPS生物合成的生产菌株，主要从L.burlgaricus NCFB2772高产EPS营养条件、培养条件的优化和其对胃肠液及抗生素的耐受性两方面进行研究，以期提高L.burlgaricus NCFB2772合成EPS的产量和考察L.burlgaricus NCFB2772作为有益菌的条件。
　　本研究主要内容包括：⑴影响L.burlgaricus NCFB2772合成EPS的单因素试验结果表明，初始pH值6.5、发酵温度40℃、接种量4.5％、搅拌速度0 r/min、发酵时间18h时为该菌株合成 EPS的适宜条件。筛选初始培养基的结果表明，L.burlgaricus NCFB2772在实验室自配培养基MRS2中较其他几种培养基合成的EPS高，以此培养基为基础，进一步优化碳氮源、碳氮源之比、不同果汁的添加及添加量对L.burlgaricus NCFB2772合成EPS的影响，试验结果表明，以果糖为碳源、普通蛋白胨为氮源、1.5:10的碳氮比、苹果汁添加量为6%，EPS的合成量相对较高。⑵响应面法是通过合理的试验设计来解决多变量问题的一种统计方法。本试验通过对L.burlgaricus NCFB2772高产EPS的培养条件进行三因素三水平的响应面分析，得出回归方程：C4=-287.08+39.83C1+11.44C2+18.54C3，最优培养条件：初始pH值为6.5、接种量为4.5%、发酵温度为42℃。⑶乳酸菌的活性（ability）和耐受性（survivability）是评价其益生性的主要指标。本研究通过流式细胞术（Flow Cytometer，FCM）结合荧光染料对L.burlgaricus NCFB2772菌体细胞的耐受性进行研究，试验结果表明，该菌株能耐受pH=2.5的人工胃液；人工肠液对其影响不明显；牛胆盐对其活性影响较大，且浓度为1g/L时，L.burlgaricus NCFB2772；在万古霉素的浓度为0.1mg/ml时，耐受性较好。

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第一章 前 言

1.1引言

1.2乳酸菌胞外多糖的简介

1.3 乳酸菌胞外多糖的研究热点

1.4乳酸菌胞外多糖的应用

1.5影响乳酸菌胞外多糖产量的因素

1.6乳酸菌活性分析

1.7课题开展的依据与意义

第二章 试验材料与方法

2.1 L.burlgaricus NCFB2772菌种保藏及形态观察

2.2影响L.burlgaricus NCFB2772菌株产EPS的单因素实验

2.3 L.burlgaricus NCFB2772高产EPS营养条件的优化

2.4响应面法优化L.burlgaricus NCFB2772高产EPS的培养条件

2.5 L.burlgaricus NCFB2772菌株耐受性的研究

第三章 结果与分析

3.1 L.burlgaricus NCFB2772菌种保藏及形态观察

3.2影响L.burlgaricus NCFB2772产EPS的单因素试验

3.3 L.burlgaricus NCFB2772高产EPS营养条件的优化

3.4响应面法优化L.burlgaricusNCFB2772高产EPS的培养条件

3.5 L.burlgaricusNCFB2772菌体细胞耐受性的研究

第四章 结 论

4.1研究结论

4.2 实验中存在的不足

4.3创新点

4.4研究展望

参考文献

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致谢