精浆中白介素23的含量测定及与精液质量的关系

摘要

细胞因子与人类生殖的关系正得到广泛的研究，因为它们涉及到生殖生理和生育调节的各个方面。人的精浆中含有转化生长因子(TGF)、表皮生长因子(EGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)、干扰素γ(IFN-γ)以及一些可溶性受体，它们来自于男性生殖道的不同部位，可能对生殖系统的甾体激素合成、精子细胞的发育、及精子功能产生影响。人精浆中存在炎症性细胞因子，主要来自于白细胞中的巨噬细胞，在外来抗原、病原体和慢性炎症的情况下激活产生。这些细胞因子主要包括IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ等。在体外实验中，一些细胞因子，如IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ等，可影响人精子活动力，增加精子细胞活性氧的产生，降低精子的穿卵能力；IL-1、TNF-α可以抑制睾丸酮(T)的产生；TNF-α可以显著抑制精子的顶体酶活性和顶体反应。IL-23是2000年新发现的炎症性细胞因子，自身独特的p19亚基与IL-12的p40亚基通过二硫键形成异源二聚体细胞因子(p40p19)，它主要来源于活化单核巨噬细胞和树突细胞，通过作用于记忆性T细胞和炎症性巨噬细胞的IL-23受体而发挥功能。IL-23具有多种生物学功能，能促进T细胞尤其是CD4+T细胞增殖，促进T细胞、抗原提呈细胞产生IFN-γ与IL-12，对树突细胞的共刺激功能起调节作用，具有抗肿瘤和抗转移活性，而且与自身免疫和炎症反应疾病密切相关。在转基因小鼠实验中，广泛表达p19的转基因小鼠有严重的生长和生育方面的缺陷。至今，国内外未发现有关IL-23与人精液质量关系的文献报道。本课题在对研究对象进行精液常规参数、精子形态检查的基础上，检测了人精浆中IL-23、IL-6、IL-8、TNF-α的含量，同时检测了其血清T、FSH、LH值，并对IL-23与精浆中IL-6、IL-8、TNF-α含量的关系及其与精液常规参数、精子形态、血生殖激素之间的关系进行了分析。现将结果报道如下。 1.材料与方法 1.1标本来源 1.1.1 2007年5～6月共收集57份人类精液标本，其中45份来自浙江省人类精子库的供精志愿者，共45例，年龄20～25周岁，平均(21.8±1.1)周岁，全部为在校学生，未婚；其余12份来自浙江省计划生育专科门诊部就诊的男性不育症病人，未经抗生素治疗，共12例，年龄26～38周岁，平均(30.1±3.6)周岁。 1.1.2分组：根据WHO正常人前向运动精子(a级+b级)百分率和精子密度参考值将57份人类精液标本分成两组，其中精子密度≥20×106／ml且a+b≥50％作为精液质量正常组(35份)；密度<20×106／ml或a+b<50％、或密度<20×106／ml且a+b<50％为异常组(22份)。 本研究中不包括无精子症和白细胞精子症病人，所有研究对象外生殖器检查均无异常；双侧睾丸均≥12ml；尿常规检查白细胞阴性。 1.2方法 1.2.1精液标本收集：所有受试者均禁欲3—5天，以手淫法采集精液于无菌烧杯内，置37℃水浴箱内液化后备查。 1.2.2精液常规分析：待精液完全液化后，按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》(第四版)进行精液分析，内容包括精液量、PH值、液化时间、外观、精子密度、精子活力、活动率等指标。 1.2.3精子形态染色及分析：待精液液化后，将精液滴于洁净玻片上，推成薄片，自然干燥后，改良巴氏染色，树胶封固。精子形态分析按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》(第四版)进行。油镜下观察，计数至少200个精子以上，按标准对精子形态进行分类，并分别记录其结果。包括正常精子百分率、头部异常百分率、颈部及中段异常百分率、尾部异常百分率、胞浆小滴百分率。 1.2.4精浆中IL-23、IL-6、IL-8及TNF-α水平测定：取部分完全液化后的精液以3 000 rpm／分钟离心20分钟，分离精浆保存于-20℃待行各种细胞因子的检测。采用上海博光生物科技有限公司进口分装试剂盒，应用ELISA夹心法测定精浆中IL-23、IL-6、IL-8及TNF-α含量。 1.2.5血清T、FSH、LH测定：所用仪器为德国拜耳(Bayer)公司ACS：18O SE全自动化学发光免疫分析系统(system)，其灵敏度可达10-12g／L；所用试剂均为随机配套试剂。 1.2.6统计学分析：所有数据以mean±SD表示，组与组均值之间比较采用独立样本t检验，相关分析采用线性回归法。采用SPSS 11.5统计软件包进行分析。 2.结果 2.1从精液分析的结果显示，精液质量正常组的精子密度、前向运动百分率、活动率、存活率及精子形态正常率均显著高于异常组。PH值无显著差异。 2.2所有标本的精浆中均可检测到IL-23，含量为8.19±4.60pg／ml，范围1.44-19.35pg／ml。 2.3精液质量正常组的精浆IL-23含量为6.37±3.58pg／ml。精液质量异常组的精浆IL-23含量为11.08±4.63 pg／ml，显著高于精液质量正常组的IL-23含量。进一步分析显示，精浆IL-23含量在前向运动精子(a+b)<50％的研究对象中明显高于前向运动精子≥50％的研究对象，相关系数r=-0.429，IL-23的含量与前向运动精子百分率呈负相关；精浆中IL-23的含量与精子正常形态率的相关系数r=-0.266，精浆中IL-23的含量与精子正常形态率存在负相关。 2.4精浆中IL-23含量与IL-6、IL-8和TNF-α的关系 经相关性分析后，精浆中IL-23含量与精浆中IL-6、IL-8和TNF-α含量的相关系数分别为0.820、0.586和0.516，均存在显著的正相关。2.5精浆中IL-23含量与血清FSH、LH、T含量的关系精浆中IL-23的含量分别与血清FSH、LH、T水平经相关性分析后，其结果显示均不存在相关性。 3.结论 人类精浆中存在IL-23，精液质量正常的研究对象精浆中含量为6.37±3.58pg／ml；精液质量异常的研究对象精浆中IL-23含量明显升高(11.08±4.63pg／ml)；精浆中IL-23含量与前向运动精子百分率、精子的正常形态率存在显著负相关，与精浆中IL-6、IL-8、TNF-α水平存在显著的正相关，但与血清生殖激素FSH、LH、T的水平不存在相关性。

目录

前言

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

References:

白细胞介素与男性精液质量

致谢