精浆中IL-17水平与精液质量关系的研究

摘要

细胞因子(Cytokine)是指由活细胞分泌,具有生物活性的多肽或蛋白质产物,对睾丸诸多方面的功能有一定影响,尤其在精子发生、发育、成熟、获能和受精能力等方面均有很重要的作用。白细胞介素(IL)-17也称为细胞毒性T细胞抗原8(cytotoxic T lymphocyte associated antigen8,CTLA8),可以诱导基质细胞分泌IL-6、IL-8,并能促进巨噬细胞释放IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12及TNF-α。有研究显示,精浆中的细胞因子包括白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12及肿瘤坏死因子(TNF)-α等水平对精液的密度、活力等精液参数有影响。另外,IL-17水平变化与早期内异症及内异症不孕的发病有关。至今,国内外未见有关IL-17与精液质量关系的文献报道。为探讨白细胞介素(IL)-17在男性不育中所起的作用,我们对浙江省计划生育科学技术研究所的供精志愿者及部分男性不育症病人精浆中IL-17水平进行了检测,现将结果报道如下。
　　1、材料与方法
　　1.1标本来源1.1.1供精志愿者:2007年5-6月至浙江省人类精子库进行首次精液筛查的供精志愿者,共45例,年龄20-25周岁,平均(21.8±1.1)周岁,全部为在校学生,未婚,其中10例供精志愿者有性伴侣。1.1.2男性不育症病人:2007年5～6月至浙江省计划生育专科门诊部就诊的男性不育症病人(精子密度或活力两次未达到WHO正常人参考值),共12例,年龄26～38周岁,平均(30.1±3.6)周岁,均已婚。所有研究对象外生殖器检查均无异常;双侧睾丸均不小于12ml;血清性激素FSH、LH、T检测正常;尿常规检查白细胞阴性。
　　1.2方法
　　1.2.1精液标本收集:嘱供精者取精前禁欲3-5天,先排尿,将阴茎、龟头及双手用0.1％的新洁尔灭消毒,以手淫法采集精液于无菌烧杯内,置37℃水浴箱内液化。
　　1.2.2精液常规分析:待精液完全液化后,按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作实验室检验手册》(1999)进行精液分析,内容包括精液量、PH值、液化时间、外观、精子密度、精子活力、活动率等指标。留取0.5ml精液分别在精液取出后4小时、8小时、24小时进行精子存活率分析。
　　1.2.3精子形态染色及分析:待精液液化后,将精液滴于洁净玻片上,推成薄片,自然干燥后,改良巴氏染色,树胶封固。精子形态分析按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作实验室检验手册》(1999)进行。油镜下观察,计数至少200个精子以上,按标准对精子形态进行分类,并分别记录其结果。包括正常精子百分率、头部异常百分率:颈部及中段异常百分率、尾部异常百分率、胞浆小滴百分率。
　　1.2.4精液细菌菌落计数:吸取液化的精液标本,分别用灭菌的蒸馏水按1:10、1:100、1:1000稀释至1000μl,将稀释好的精液依次加到培养皿内,然后将已预热至56℃10%的羊血与琼脂混合液分别加到培养皿中,并与精液充分混匀,置37℃,培养48小时,计算菌落数。
　　1.2.5精浆中IL-17、IL-6、IL-8及TNF-α水平测定:精液完全液化后取部分精液以600 g/min离心的20 min,分离精浆保存于-20℃,待行各种细胞因子的检测。采用上海博光生物科技有限公司进口分装试剂盒,应用ELISA夹心法测定精浆中IL-17、IL-6、IL-8及TNF-α含量。
　　1.2.6血清T、FSH、LH测定:所用仪器为德国拜耳(Bayer)公司ACS:18O SE全自动化学发光分析系统(Automated chemiluminescence system),其灵敏度可达10-12g/L;所用试剂均为随机配套试剂。1.2.7统计学分析所有数据以mean±SD表示,组与组均值之间比较采用独立样本t检验,相关分析采用线性回归法。采用SPSS11.5统计软件包进行分析。2.结果2.1精浆中可检测出IL-17,最低为0.45 pg/ml,最高为16.67 pg/ml,平均为4.39±3.20pg/ml。
　　2.2 IL-17与精液参数的关系。
　　精液分析结果按前向运动精子(a级+b级)百分率分为低活力组(a级+b级<50%)和高活力组(a级+b级≧50%),低活力组IL-17浓度(6.00±3.97 pg/ml)明显高于高活力组(3.37±2.09pg/ml),有显著性差异(P<0.01);按精子密度<60×106/ml及≧60×106/ml分组,两组IL-17浓度无显著性差异(P>0.05);按正常形态精子百分率<30%及≧30%分组,两组IL-17浓度无显著性差异(P>0.05);按PH值<7.5及≧7.5分组,两组IL-17浓度无显著性差异(P>0.05)。2.3精浆中IL-17水平与精子4h、8h、24h内死亡率的关系。IL-17低浓度组精子4h、8h、24h内死亡率均明显低于IL-17高浓度组(P<0.05)。2.4精液细菌菌落计数与精浆中IL-17浓度的关系。细菌菌落计数结果按<104CFU/ml及≧104 CFU/ml分组,两组IL-17浓度无显著性差异(P>0.05),2.5精浆中IL-17水平与精浆中IL-6、IL-8及TNF-α水平的关系。IL-17低浓度组的IL-6浓度(15.71±9.19pg/ml)明显低于IL-17高浓度组(45.47±16.52pg/ml),有显著性差异(P<0.01),P<0.01;IL-17低浓度组的IL-8浓度(374.4±216.2pg/ml)明显低于IL-17高浓度组(1214.2±1073.8pg/ml),有显著性差异(P<0.01);两组TNF-α水平无显著性差异(P>0.05)。经相关性分析,精浆IL-17与IL-6、IL-8、TNF-α均呈正相关,IL-17与IL-6的相关系数r=0.801(P<0.01);IL-17与IL-8的相关系数r=0.579,(P<0.01);IL-17与TNF-α的相关系数r=0.361(P<0.01)。2.6精浆中IL-17浓度与血浆中FSH、LH、T浓度的关系。按IL-17的浓度分组,两组血清中FSH、LH、T水平均无显著性差异(P>0.05)。
　　3.结论：人类精浆中存在IL-17,所有调查对象精浆中IL-17的浓度平均为4.39±3.20pg/ml;精浆中IL-17水平与精液活动力及存活时间相关,而与精子密度、形态及PH值无关,与精液中细菌数量无关;与IL-6、IL-8、TNF-α水平有一定的相关性;与血清生殖激素FSH、LH、T的水平无关。本研究提示精浆中IL-17在男性生殖功能中起重要作用。

目录

一、中文摘要

二、英文摘要

三、论文正文

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

四、综述

五、致谢