PRRSV NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制及冰冻切片免疫荧光技术快速检测PRRSV抗原

摘要

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。近几年来我国大部分地区夏秋季出现猪的高热病，我国农业部2007年确定引起高热病的主要病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株。目前，该病已是危害我国养猪业最严重的病毒性疫病之一。 本研究将纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) NVDC-JXA1株免疫6～8周龄BALB/c小鼠。应用淋巴细胞杂交瘤技术，最后一次免疫后第三天取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光试验(IFA)筛选，得到2株稳定分泌抗PRRSV NVDC-JXA1株特异性抗体的杂交瘤细胞，命名为1D12、5H5。经鉴定其抗体亚型分别为IgG2b、IgM，两株均为κ链，细胞上清ELISA效价1:103～1:104腹水ELISA效价可达1:105～1:107两株单克隆抗体与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪乙脑病毒无交叉反应，与PRRSV VR-2332株有交叉反应。免疫印迹(Western-blot)结果显示，该两株单抗是针对PRRSV NVDC-JXA1膜基质蛋白的特异性McAb。 利用前期获得的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体1D12作为一抗，建立了在冰冻切片中快速检测PRRSV抗原的免疫荧光(IFA)方法。运用该方法检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、猪乙脑病毒感染发病猪组织无特异性免疫荧光信号，而检测PRRSV NVDC-JXA1株人工感染28日龄仔猪，在人工接种后14 d即可在肺脏、肺门淋巴结、脾脏、扁桃体、肾脏、大脑等组织脏器中检测到特异性免疫荧光信号；检测临床可疑病例的PRRSV的阳性率(62.5％)比病毒分离率(31.25％)高，并且符合率达100％。结果表明，该方法具有快速、敏感、特异、直观的特点，可用于PRRSV感染的实验室快速诊断。

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文摘

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论文说明：英文缩略语表

声明

第一章猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)研究进展

1.1PRRSV基本特性

1.3PRRSV的组织器官分布

1.4PRRS诊断技术

1.5PRRSV单克隆抗体研究进展

1.6研究的目的及意义

第二章PRRSV NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制

2.1材料和方法

2.2结果

2.3讨论

第三章冰冻切片免疫荧光快速检测PRRSV抗原

3.1.材料和方法

3.2.结果

3.3.讨论

第四章结论

参考文献

附录

致谢

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