高级氧化蛋白产物（AOPPs）的表征

摘要

自由基攻击血浆蛋白，引起后者发生氧化修饰而生成一种新型尿毒症标志一高级氧化蛋白产物(AOPPs，AdvancedOxidativeProteinProducts)。其中，血浆白蛋白作为人体内生物大分子抗氧化体系中的主要组成部分是自由基攻击的主要对象。先前的研究已证明尿毒症病人血浆白蛋白发生氧化修饰高于正常人，为了解自由基攻击对白蛋白分子结构产生何种影响，本文对正常人和尿毒症病人血浆白蛋白的氨基酸组成进行了分析。方法：以正常人为对照组、尿毒症病人为实验组，AOPPs和羰基为氧化应激指标，先对各组的氧化应激水平进行评价。随后应用二维色谱法从各组血浆中分离、纯化出白蛋白，并对分离、纯化的色谱条件进行优化分析。色谱条件的优化包括流速、蛋白载量、温度、离子强度、有机改性剂用量等。第一维色谱采用高效凝胶色谱法(HP-SEC)，第二维色谱采用反相色谱法(RP-HPLC)。纯化出的血浆白蛋白经过HP-SEC、RP-HPLC、克分子吸光系数等方法进行纯度鉴别。获得高纯的血浆白蛋白后，再对其氨基酸组成进行分析比较。结果：尿毒症病人的AOPP水平要高出正常人的近一倍(正常人～病人=71．07+13．90～161．91+19．89，p<0．001)，羰基水平也高出正常人一倍(正常人～病人=0．75±0．07～1．64±O．13，p<0．001)。已知人白蛋白的克分子吸光系数口￡280cm=35,200M-1cm-1，测得用作对照的标准白蛋白的克分子吸光系数为355¨+528Mqcm-1(相对标准偏差=O．9％)，测得纯化后的血浆白蛋白为33205+1618M-1cm-1(相对偏差=5．7％)。说明经二维色谱纯化获得的的白蛋白纯度较高。随后的白蛋白氨基酸组成分析证明，同正常人相比，尿毒症病人水解出的17种白蛋白氨基酸组成大部分要低10％左右，其中胱氨酸和精氨酸在二组间有显著性统计差异(正常人～尿毒症病人：精氨酸：2．16士O．13vs．1．87土0．17，p<0．05；胱氨酸：0．284-0．06vs．0．17+0．02，p<0．05)。结论尿毒症患者中氨基酸的普遍损失是影响其血浆白蛋白结构和功能的关键因素，其中胱氨酸和精氨酸是自由基攻击的二个主要靶基团。

目录

前言

材料和方法

结果

讨论

图表

参考文献

致谢

蛋白质的氧化修饰与尿毒症