青岛地区贝类中诺瓦克样病毒污染状况调查与风险评估初探

摘要

诺瓦克样病毒(Norwalk-like viruses，NLVs)是非细菌性肠胃炎的主要病原体，通过食品和水源传播可以引起全球范围的流行。美国联邦疾病控制中心的调查表明约有42％的肠胃炎暴发与诺瓦克样病毒有关。而在由食物污染造成的病毒性胃肠炎流行中，90％的病原是该病毒。流行病学调查提示双壳软体动物是NLVs最主要的载体。作为沿海地区，青岛市贝类的消费量很大，而贝类产品中NLVs污染情况的调查却未见报道。 NLVs难以增殖，变异多，鉴别和检测非常困难，传统的免疫学及血清学检测方法存在很大的局限性。聚合酶链式反应(PCR)以及序列特异性核酸体外扩增(NASBA)等分子检测技术在病毒等致病微生物的检测中已显示出越来越多的优势。本文利用反转录PCR(RT-PCR)和NASBA法对青岛地区主要海产贝类中NLVs进行了检测，优化和比较了两种方法，初步获得了青岛地区海产贝类中NLVs污染情况的基础资料。 比较了酸吸附洗脱和碱洗脱两种不同病毒粒子提取方法，酸吸附洗脱法检出灵敏度比碱洗脱法高1倍。优化了病毒粒子RNA的提取方法，发现影响RNA回收率的关键因素是沉淀时间，确定病毒RNA的沉淀时间为>2h。摸索了NASBA法检测牡蛎中NLVs的反应条件，初步建立了牡蛎中NLVs NASBA检测方法。但是，NASBA方法对阳性样品的检出率低于RT-PCR方法。 从2005年12月至2007年4月，从青岛市内三区(市南区、市北区、四方区)主要水产品市场收集了牡蛎样品208个、杂色蛤样品169个、毛蚶样品169个、扇贝样品100个，用RT-PCR方法进行检测。其中，杂色蛤和扇贝样品中均未检出NLVs，牡蛎和毛蚶阳性检出率分别为10.1％和5.3％。冬季(12月至次年2月)是牡蛎中NLVs检出频率最高的季节，检出率达到18.8％；秋季(9月至11月)其次，检出率为12.5％；春季和夏季的检出率相对较低，分别为4.2％和2.1％。毛蚶与牡蛎的情况相似，秋季和冬季NLVs污染较高，阳性检出率均为7.7％，春季其次，检出率为5.1％，夏季未发现NLVs污染。对阳性牡蛎样品不同部位的检测发现，NLVs存在于牡蛎的内脏团中，而肌肉以及鳃等部位均未发现NLVs。在此次调查过程中还发现，从市北区采集的牡蛎样品中NLVs阳性检出率最高，达到14.1％，市南区其次，为10.2％，四方区最低，为3.8％。从市南区采集的毛蚶样品中NLVs阳性检出率最高，为7.6％，市北区其次，为6.1％，四方区未检出NLVs阳性毛蚶样品。阳性贝类样品主要集中在团岛水产品市场和南山水产品市场。本论文在参考国外风险评估案例的基础上，通过比较我国与欧美其他国家NLVs流行病学研究现状，并结合青岛地区贝类产品中NLVs的污染状况，对青岛地区贝类产品中NLVs定性风险评估进行了初步的探讨。最终确定青岛地区居民食用海产贝类感染NLVs的风险大约为28.人/100000人口，属于二级风险(10～100 人/100000人口)。并根据风险评估的结果，提出了相应的风险管理措施。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

第二章诺瓦克样病毒检测方法的研究

1.材料、试剂和仪器

1.1材料

1.2试剂

1.3仪器

2.实验方法

2.1诺瓦克样病毒RT-PCR检测方法

2.2诺瓦克样病毒NASBA检测方法

3.试验结果

3.1诺瓦克样病毒RT-PCR检测方法

3.2诺瓦克样病毒NASBA检测方法

4.讨论

4.1诺瓦克样病毒RT-PCR检测方法的研究

4.2诺瓦克样病毒NASBA检测方法

5.小结

第三章青岛地区贝类产品中诺瓦克样病毒的检测

1.材料与方法

1.1试验材料

1.2试验方法

2.试验结果

2.1青岛地区太平洋牡蛎中NLVs的检测

2.2青岛地区杂色蛤中NLVs的检测

2.3青岛地区毛蚶中NLVs的检测

2.4青岛地区栉孔扇贝中NLVs的检测

2.5小结

3.讨论

3.1青岛地区不同贝类中NLVs的污染状况

3.2 2005年12月至2006年12月青岛地区牡蛎中NLVs的污染状况

3.3 2005年12月至2006年12月青岛地区毛蚶中NLVs的污染状况

3.4牡蛎中不同部位NLVs的检测状况

4.小结

第四章青岛地区贝类中产品中NLVs风险评估初探

1.危害识别

1.1诺瓦克样病毒

1.2食品

1.3 NLVs的检测方法

2.危害描述

2.1症状

2.2剂量——反应

3.暴露评估

3.1影响NLVs感染发生可能性的因素

3.2我国贝类产品中NLVs的污染状况

3.3欧美国家贝类产品中NLVs的存在状况

3.4青岛地区贝类产品的消费量

3.5风险人群

4.风险描述

4.1我国NLVs引起胃肠炎的暴发

4.2国外NLVs引起肠胃炎的暴发

4.3风险分类

4.4小结

5.风险管理

5.1污染来源的控制

5.2贝类产品的控制

5.3切断其他传播途经

5.4风险管理措施

参考文献

致谢