透明质酸发酵培养基的优化及其对生产菌透明质酸合酶表达的影响

摘要

透明质酸(HA)是由葡糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖为双糖单位组成的高分子直链黏多糖,广泛存在于脊椎动物的软组织如皮肤、关节滑液、眼玻璃体中.由于HA具有黏度高、保湿性好等特点,已广泛应用于医药、化妆品等领域.目前HA的生产主要有提取法和发酵法.由于发酵法生产HA有不受原料限制、产物易纯化等优点,已成为生产HA的主流.发酵法所用的微生物链球菌对营养要求苛刻,不同培养基原料对HA产量的影响很大.对HA产量影响较大的培养基原料主要是蛋白胨和酵母粉,这些原料由于受其工艺水平的限制,不同厂家甚至是同厂家不同批号之间也有较大的差异,从而影响HA发酵生产的产量稳定性.另外,细胞通透性调节剂也可能影响HA发酵产量.因此,为了稳定和提高HA发酵生产的产量,有必要考察各种因素对HA发酵的影响.本研究探讨了不同营养元素、细胞通透性调节剂对HA发酵产量的影响,优化了HA发酵培养基,并研究了优化培养基对生产菌HA合酶表达的影响.

目录

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摘要

ABSTRACT

符号说明

第一章前言

1国内外研究现状

1.1分子生物学方面的研究

1.2发酵方面的研究

1.3下游分离纯化方面的研究

2本课题拟研究的问题

第二章不同营养元素对菌体生长和HA产量的影响

1材料

1.1菌种

1.2培养基

1.3试剂及溶液配制

1.4主要仪器设备

2方法

2.1菌种的纯化

2.2种子液的制备

2.3发酵试验

2.4放大试验

2.5菌体生长的测定

2.6 HA含量的测定

3结果

3.1氨基酸类物质对菌体生长和HA产量的影响

3.2维生素类物质对菌体生长及HA产量的影响

3.3核苷酸碱基对菌体生长和HA产量的影响

3.4无机盐及微量元素对菌体生长和HA产量的影响

3.5放大试验

4 讨论

第三章细胞通透性调节剂对HA产量的影响

1材料

1.1菌种

1.2培养基

1.3试剂

1.4主要仪器设备

2方法

2.1菌种的纯化

2.2种子液的制备

2.3不同时期添加表面活性剂BH和溶菌酶对HA产量的影响

2.4表面活性剂BH和溶菌酶的不同添加量对HA产量的影响

2.5 HA含量的测定

3结果

3.1表面活性剂BH对HA产量的影响

3.2溶菌酶对HA产量的影响

4讨论

第四章优化培养基对透明质酸合酶表达的影响

1材料

1.1菌种

1.2培养基

1.3试剂及试剂盒

1.4主要仪器设备及耗材

1.5溶液配制

2方法

2.1提取分离总RNA

2.2 RT-PCR

2.3优化培养基前后菌体中透明质酸合酶mRNA的水平

3结果

3.1提取分离总RNA

3.2 RT-PCR

3.3优化培养基前后菌体中透明质酸合酶mRNA的水平

4 讨论

小结

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的论文

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