猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备与初步应用

摘要

用猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)核衣壳蛋白基因(ORF7)的昆虫细胞表达产物BacN作为免疫原,腹腔注射免疫BALB/c小鼠;3周后腹腔注射等量抗原进行二次免疫;再过2周,加倍剂量腹腔注射进行加强免疫,3天后,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合.经间接ELISA进行杂交瘤筛选,共获得3株能针对PRRSV核衣壳蛋白的特异性单克隆抗体(简称单抗),分别命名为1F9、5A5和5H8,其亚类分别为IgG1、IgG2b、IgG2b;单抗腹水的间接ELISA效价分别为2<'15>、2<'17>、2<'18>;单抗腹水的间接免疫荧光(Indirect immunofluorescent assay,IIF)效价分别为2<'16>、2<'16>、2<'15>.IIF试验结果表明,这3株单抗仅与PRRSV发生特异性反应,与常见猪其它病毒如猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒1型以及猪圆环病毒2型均无反应性.Western blot试验结果表明,单抗5A5针对PRRSVN蛋白线性表位,而单抗1F9和5H8可能针对PRRSVN蛋白的构象型表位,其具体表位还需进一步鉴定.由于N蛋白在PRRSV病毒粒子的蛋白成分中含量最多,且编码N蛋白的基因ORF7比较保守,因此这3株单抗的获得为PRRS提供了临床诊断试剂.用所获得的3株单抗共检测了7头临床疑似PRRS的病死猪,灌洗肺脏得到肺泡巨噬细胞,进行IIF试验,结果沭阳某猪场2头猪为阳性,其它均为阴性.为了进一步证实检测结果的可靠性,我们对沭阳两头阳性猪的肺组织进行了病毒分离,结果病料在盲传到第四代时在Marc-145细胞上产生了明显的细胞病变,用此第四代病毒培养物进行IIF检测,结果也为阳性,进一步证实了所获得的3株单抗检测临床样品结果的可靠性.

目录

符号说明

文献综述

1.PRRSV的一般特性

2.PRRSV的分子生物学特性

3.PRRS的疾病特征

4.病理变化

5.PRRS的诊断

6.疫苗免疫及防制策略

论文研究部分一 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

材料与方法

结果

讨论

论文研究部分二间接免疫荧光试验(IIF)检测PRRSV方法的建立及初步应用

材料与方法

结果

讨论

参考文献

本文小结

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文