在异种心脏移植免疫耐受的诱导中MSCs修饰胸腺的可行性实验研究

摘要

目的：豚鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外扩增后作为种子细胞行大鼠胸腺注射，以了解作为种子细胞的MSCs在受体胸腺内的演化过程，并对异种心脏移植免疫耐受的诱导中MSCs修饰胸腺的可行性进行论证。同时，通过豚鼠到大鼠腹腔心脏移植模型，观察受体大鼠产生异种移植免疫耐受的现象。 方法：取豚鼠MSCs进行分离纯化体外扩增至第三代，并行超顺磁多聚赖氨酸氧化铁纳米(Fe203-PLL)颗粒和4，6-二咪基一4．联苯基吲哚(DAPI)标记，标记后的豚鼠MSCs行胸腺注射，7天后进行切片普鲁士蓝染色和荧光显微镜观察豚鼠MSCs形态改变。 豚鼠到大鼠腹腔心脏移植诱导免疫耐受的实验分三组。供体(三色豚鼠)和受体(SD大鼠)随机分为：A组(对照组)：仅行豚鼠到大鼠腹腔心脏移植，在心脏移植前和后对受体不作任何处理。B组(胸腺修饰IT组)：1—5×l05MSCs胸腺注射后第7天行豚鼠到大鼠腹腔心脏移植，余处理同A组。C组(IT加CVF组)：MSCs胸腺注射后第6天在受体腹腔注射中华眼睛蛇毒因子(CVF)40u／kg(即0．4mg／kg)。24小时后心脏移植手术时下腔静脉再次注射才CVF60u／kg。D组(CVF组)：术前24小时腹腔注射中华眼睛蛇毒因子(CVF)40u／kg(即0．4mg／kg)，手术前下腔静脉注射CVF60u／kg。观测指标：移植心脏的存活时间、病理改变、供受体淋巴细胞毒性试验。 结果：豚鼠间充质干细胞能适应大鼠胸腺微环境并能生存，参与血管壁的形成，可以转化为胸腺前T细胞和被膜下间质细胞等多种组织细胞，同时大鼠胸腺有部分组织溶解坏死萎缩。 (1)病理：供心停跳时A、B组心脏病理表现均呈典型超急性排斥反应(HAR)表现，C、D组呈迟发性排斥反应(DXR)表现。(2)供心平均存活时间(MST)：A组18．80±10．83分钟，B组8．4±3．97分钟，C组344±55．50分钟，D组：297±82．43分钟。A与B组及C与D组间比较P＞0．05。C、D组平均存活时间延长较A、B明显延长P<0．05。(3)供受体异种混合淋巴细胞反应(XMLR)，测得光密度值(OD值)分别为：A组：0．764-0．03，B组：0．744-0．02，C组：0．634-0．04，D组：0．65+0．02；空白OD值为：0．30±0．04。其中B组较A组减弱但P＞0．05，C、D组比较P＞0．05，A、B组与C、D组间比较P＜0．05。 结论：受体大鼠胸腺微环境能适合豚鼠间充质干细胞生存，并转化为多种组织细胞，同时大鼠胸腺有部分组织溶解坏死萎缩。 豚鼠MSCs胸腺修饰后7天在豚鼠到大鼠心脏移植模型中，单纯MSCs进行胸腺修饰不能排除HAR的发生，但对DXR的发生有一定的延缓作用。

目录

文摘

英文文摘

苏州大学学位论文独创性声明及使用授权的声明

前言

第一部分MSCs分离纯化标记及胸腺注射后的示踪试验材料及方法

第一部分MSCs分离纯化标记及胸腺注射后的示踪结果

第一部分MSCs分离纯化标记及胸腺注射后的示踪讨论

第一部分MSCs分离纯化标记及胸腺注射后的示踪结论

第一部分MSCs分离纯化标记及胸腺注射后的示踪参考文献

第二部分豚鼠到大鼠腹腔心脏移植诱导免疫耐受的实验研究材料及方法

第二部分豚鼠到大鼠腹腔心脏移植诱导免疫耐受的实验研究结果

第二部分豚鼠到大鼠腹腔心脏移植诱导免疫耐受的实验研究讨论

第二部分豚鼠到大鼠腹腔心脏移植诱导免疫耐受的实验研究结论

第二部分豚鼠到大鼠腹腔心脏移植诱导免疫耐受的实验研究参考文献

间充质干细胞胸腺修饰诱导种移植免疫耐受的研究进展

英汉双解缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

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