食管鳞状细胞癌细胞株MT-3基因CpG岛超甲基化的意义

摘要

食管癌是我国高发的恶性肿瘤。其发生是多种癌基因的激活与抑癌基因的失活长期协同作用的结果。基因异常甲基化是目前所知的除突变、缺失和移位之外的另一种基因异常改变，与其它基因异常相比，基因的甲基化研究不仅对恶性肿瘤的病因、早期诊断及预后评价有很大价值，而且对肿瘤的基因治疗研究有着重要的作用。目前已知，MT-3基因是细胞内一种金属硫蛋白的编码基因，不仅具有许多重要的生理功能，还可以抑制细胞增殖，已有研究发现MT-3基因在胃癌中存在异常甲基化。本课题应用MSP和RT-PCR方法检测食管鳞状细胞癌细胞株中的MT-3基因的甲基化情况及其对MT-3基因mRNA表达的影响，以揭示MT-3基因甲基化在食管癌发生、发展中的作用。 方法 1 选取五种食管癌细胞株和正常人血液单核细胞，其中TE-1，TE-13，TTN和ECA-109为食管鳞状细胞癌细胞株，0E33为食管腺癌细胞株，应用RT-PCR技术，对其mRNA的表达情况进行研究，旨在揭示MT-3基因RNA表达与食管鳞状细胞癌发生的关系。 2 选取TE-1，TE-13，1TN，ECA-109和OE33五种食管癌细胞株，应用MSP技术，对其MT-3基因CpG岛的超甲基化情况进行研究，从而了解MT-3基因CpG岛的超甲基化状况与食管鳞状细胞癌发生的关系。 3 应用RT-*PCR技术和MSP技术对五种食管癌细胞株经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理后进行研究，包括MT-3基因CpG岛甲基化情况和MT_3基因mRNA表达量的研究，以阐明MT-3基因CpG岛的甲基化和MT-3基因mRNA表达与食管鳞状细胞癌发生发展的关系。 结果 1 MT-3基因mRNA在试验的细胞中均有不同程度的表达。其中正常人血液单核细胞的MT-3表达量最大，其次为TE13，而OE33没有表达。 2 所有实验的食管鳞状细胞癌细胞株中MT-3基因mRNA的表达量明显低于正常人血液单核细胞的表达量(P<0.01)。 3 MSP结果显示食管鳞状细胞癌细胞株中广泛存在MT-3基因CpG岛的甲基化，其中以TE1最重，没有非甲基化引物扩增产物，处于完全甲基化状态。其余三种食管鳞状细胞癌细胞株甲基化程度相对较弱，为半甲基化状态。 4 MSP结果显示经5-Aza-CdR处理后五种食管癌细胞株的MT-3基因超甲基化状态均发生了去甲基化改变，最为明显的是TEl3和OE33，TEl3细胞株基本上发生了完全去甲基化，OE33细胞株也出现了明显的非甲基化引物扩增产物。 5 各细胞株经5-Aza-CdR处理后mRNA表达量较处理前明显增多(P<0.01)。 结论 1 食管癌细胞株中存在不同程度的MT-3蛋白表达，其中OE33完全没有发现MT-3蛋白表达，其余四种食管鳞状细胞癌细胞株可检测到多少不等的MT-3蛋白表达。 2 实验的所有食管鳞状细胞癌细胞株的MT-3蛋白表达量明显低于正常人血液单核细胞的表达量，即食管鳞状细胞癌细胞株中存在广泛的MT-3蛋白表达水平下降。 3 实验的所有食管鳞状细胞癌细胞株的MT_3基因CpG岛广泛存在超甲基化。 4 MSP结果显示：经5-Aza-CdR处理后的四种食管鳞状细胞癌细胞株中的MT-3基因CpG岛超甲基化状态均发生了不同程度的去甲基化改变。 5 食管鳞状细胞癌细胞株中广泛存在MT-3基因CpG岛的超甲基化，而且这些甲基化可以引起MT-3蛋白表达水平的下降。经5-Aza-CdR处理后，MT-3基因的甲基化状态解除，MT-3蛋白的表达水平也相应地升高。因此，MT-3基因CpG岛的超甲基化与食管鳞状细胞癌的发生和发展存在必然联系。

目录

摘要

引言

第一部分食管鳞癌细胞株中MT-3基因的mRNA表达情况研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分MT-3基因启动子区CpG岛甲基化状况研究

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

小结

参考文献

第三部分5-氮杂脱氧胞苷对MT-3基因CpG岛超甲基化的逆转

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

综述食管癌与MT-3基因CpG岛甲基化的研究进展

致谢

个人简历