软骨多糖对S180荷瘤小鼠免疫保护作用的研究

摘要

本课题以从猪软骨中提取的短链多糖为研究对象,采用小鼠肉瘤S180细胞分别建立动物腹水瘤模型和实体瘤模型,研究其抗肿瘤免疫保护的作用机制。
　　 建立S180腹水瘤模型,建模5天后开始给药软骨多糖治疗研究软骨多糖与小鼠生命延长率关系,脾指数和胸腺指数的变化。HE染色观察小鼠脾细胞的变化。建模后治疗并观察软骨多糖对S180荷瘤小鼠的细胞免疫作用。MTT比色法考察软骨多糖对S180实体荷瘤小鼠免疫系统的影响,分别测量ConA和LPS刺激下小鼠脾细胞和外周血淋巴增殖情况,发现其能够不同程度的提高小鼠的T细胞和B细胞刺激指数。NK细胞杀伤活性实验和E花环形成实验表明软骨多糖能提高外周血NK细胞和脾NK细胞的活性,及外周血单个核细胞E花环形成率。脾细胞涂片的免疫荧光检测得到跨膜糖蛋白CD40和CD40L的表达水平也有一定程度的上调。流式细胞术(FCM)检测淋巴细胞亚群的变化,软骨多糖能使CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+细胞比值明显升高,从而达到调节淋巴细胞亚群的比例,起到调整细胞免疫功能的作用,使机体的免疫调节功能得到进一步改善。巨噬细胞吞噬实验表明软骨多糖能提高巨噬细胞吞噬中性红和鸡红细胞的能力,血细胞染色说明软骨多糖能提高外周血中性粒细胞(PMN)的数量,从而起到抗肿瘤的作用。
　　 软骨多糖对荷瘤小鼠体液免疫的作用:单向琼脂扩散免疫实验发现,在软骨多糖的作用下,荷瘤小鼠分泌的抗体IgG抗体明显增加,增强体液免疫效应,有助于肿瘤免疫。用ABC-EI,ISA法测定小鼠外周血细胞因子的变化,发现软骨多糖能改变细胞因子IL-2、IL-6,TNF-α的分泌,调节肿瘤的发生发展,在治疗肿瘤方面具有很大的作用。
　　 综上所述,通过研究软骨多糖对S180荷瘤小鼠免疫保护作用,证明软骨多糖具有一定的抗肿瘤活性,是一种很有开发潜质的抗癌活性物质。

目录

文摘

英文文摘

主要符号表

1 前言

1.1 肿瘤与免疫概述

1.1.1 肿瘤简介

1.1.2 机体的抗肿瘤免疫学机制概述

1.2 多糖的相关知识

1.2.1 多糖的概述

1.2.2 多糖的基本结构

1.2.3 具有抗肿瘤活性多糖的类别

1.2.4 多糖抗肿瘤的直接抑制机制

1.2.5 多糖间接抗瘤的免疫调节作用和机制

1.3 实验动物肿瘤模型的建立及其应用

1.3.1 动物肿瘤模型的分类

1.3.2 动物肿瘤模型的应用

1.4 实验肿瘤细胞系的选择

1.5 本课题的研究目的及意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验试剂及药品

2.1.2 实验仪器及材料

2.1.3 实验动物

2.1.4 实验细胞株

2.2 实验方法

2.2.1 细胞系及细胞培养

2.2.2 S-180腹水荷瘤小鼠治疗实验

2.2.3 HE染色观察脾细胞形态的变化

2.2.4 软骨多糖对S-180荷瘤小鼠的免疫作用

2.2.5 小鼠外周血中性粒细胞的免疫作用

2.2.6 软骨多糖对S-180荷瘤小鼠的IgG和细胞因子的影响

3 结果与讨论

3.1 小鼠S-180腹水瘤治疗实验

3.2 HE染色观察脾细胞形态的变化

3.3 软骨多糖对S-180荷瘤小鼠的免疫作用

3.3.1 软骨多糖对由ConA和LPS引起的脾细胞增殖的影响

3.3.2 小鼠外周血单个核细胞的分离

3.3.3 小鼠外周血淋巴细胞增殖试验

3.3.4 E花环形成试验

3.3.5 NK细胞杀伤活性的测定

3.3.6 免疫荧光法检测脾细胞涂片CD40和CD40L抗体的表达情况

3.3.7 小鼠外周血淋巴细胞CD3、4、8亚群的测定

3.3.8 巨噬细胞吞噬能力的测定

3.3.9 小鼠外周血中性粒细胞的免疫作用

3.4 软骨多糖对S-180荷瘤小鼠的IgG和细胞因子的影响

3.4.1 单向琼脂扩散免疫实验

3.4.2 细胞因子IL-2,IL-6,TNF-α的测定

4 结论

5 展望

6 参考文献

7 论文发表情况

8 致谢