西维因农药残留酶联免疫检测方法的研究

摘要

本论文对西维因农药残留的酶联免疫检测方法及化学发光免疫检测方法进行了深入系统的研究。合成了与西维因具有高度类似性的半抗原N-(1-萘氧基甲酰胺基)-6-氨基己酸(3H)，新开发的合成方法较前人的方法更加安全、实用。将合成的半抗原作为酶标抗原，与原通过1-(5-羧戊基)-3-(1-萘基)脲(8H)免疫原获得的高特异性多克隆抗体一起，共同构建了具有高灵敏性西维因酶联免疫检测方法。全面优化了检测方法中的各个参数，包括抗体包被量、酶标抗原的浓度、酶标抗原稀释液的种类等，建立了西维因药物的酶联免疫及化学发光酶联免疫检测方法，并对方法的性能指标进行了系统评价。
　　 该异源酶联免疫检测方法的特异性较采用8H酶标的同源检测提高了12倍，IC50达到2μg/kg。通过采用化学发光手段，灵敏度在此基础上又降低了10倍，达到0.2μg/kg。
　　 选取了固体及液体样品作为研究对象，包括：苹果汁、橙汁、杏仁露、桃、樱桃、黄瓜、洋白菜。液体样品通过磷酸盐缓冲液稀释即可用于检测。固体样品经过简单提取、稀释后即可用于检测。新的检测方法较之前的同源方法不仅灵敏性更高，前处理方法也更加便捷易操作，使在广泛的食品样品检测中的灵敏性提高了75倍，食品中低至6.4μg/kg的西维因含量即可被检测出来。苹果汁、橙汁、杏仁露、桃、樱桃、黄瓜、洋白菜的平均回收率分别为97.5％，93.0％，92.2％，97.5％，93.0％，101.7％和88.3％，且变异系数普遍在10％以下。
　　 通过高效液相色谱检测方法，对建立的西维因直接竞争酶联免疫检测方法和化学发光检测法的准确性进行了验证。两种方法检测结果的一致性很高，线性相关系数R2值在0.95以上，表明新开发的酶联免疫检测方法及简单、快速、有效的前处理方法在西维因检测中是可信的，并非常适用于食品中西维因的定性及定量检测。