亚胺硫磷农药残留酶联免疫检测方法的研究

摘要

论文对有机磷农药亚胺硫磷的免疫分析方法进行了深入系统的研究，合成出亚胺硫磷的半抗原，研究了半抗原与载体蛋白结合的方法，制备了高效价和高灵敏度的亚胺硫磷多克隆抗体。通过对免疫分析形式与免疫分析的特异性、灵敏性以及食品中干扰物对酶联免疫分析方法影响的研究，建立了一种简便、快捷、实用的亚胺硫磷免疫分析方法-直接竞争酶联免疫检测方法。此法灵敏度较高，IC50=20.00±0.2μg/kg，IC15=0.60±0.016μg/kg，交叉反应研究表明对于有机磷农药有着较好的特异性。
　　 在方法的应用研究中，由于亚胺硫磷广泛存在于水果蔬菜中，选取苹果、桃子、甘蓝、黄瓜、苹果汁、橙汁作为研究对象考查了它们的基质影响及其去除方法。经过甲醇提取固体样品，简单的稀释后可消除基质影响，液体样品则直接用PBS稀释后可消除基质影响。在方法的准确性实验中，在三个加标水平上，直接竞争酶联免疫方法的回收率在78～102.3％，变异系数低于13.6％。由于抗体灵敏度高，前处理方法简单，方法检出限均远远低于样品的最大残留限量值(MRL)，为实际样品的检测提供了较好的基础。
　　 通过高效液相色谱检测方法，对建立的亚胺硫磷直接竞争酶联免疫检测方法的准确性进行了验证。两种方法检测结果具有较高的相关性，线性相关系数R2值为0.9849，表明新开发的酶联免疫检测方法以及简单、快速、有效的前处理方法在农产品中亚胺硫磷的检测中是可信的，该检测体系可用于亚胺硫磷的大量样品的快速现场检测。