青春期前DEHP染毒对雌性大鼠青春期生殖系统的影响及机制探讨

摘要

目的：通过大鼠青春期前(PND21)经口给予不同剂量DEHP进行染毒，观察青春期及以后雌性大鼠生殖系统的变化，探讨DEHP染毒后对雌性大鼠生殖系统的影响及作用机制。从而探讨其对人类生殖健康的潜在危害，目前DEHP对雄性生殖系统的研究较多，但对雌性生殖系统的报道较少，本研究弥补了当前DEPH染毒对雌性性腺卵巢毒性方面研究资料的不足，并为全面评估DEHP的毒性作用提供了科学依据。
　　 方法：实验一：SPF级断奶后(PND21)的雌性SD大鼠30只随机分成三组：正常对照组10只、低剂量组10只、高剂量10只。对照组给予0．5ml玉米油，后两组组每天给予不同剂量的DEHP(低剂量组100mg/kg．d，高剂量组750mg/kg．d)，每天称量每只大鼠的体重，计算所需灌胃的DEHP的量，将DEHP溶于玉米油中(溶剂)，每只大鼠每天灌胃的总体积为0．5ml．(DEHP和玉米油混合后的总量)(1ml的DEHP重约1g)。灌胃时间从PND21开始，到PND84结束，在PND49到PND84期间，观察阴道开口时间和动情周期的改变，在PND85-88的动情间期处死动物。实验二：为了降低个体差异，对来自同一窝的雌性大鼠标记，根据体重和各窝随机分成3组，组别、各组大鼠数量、DEHP剂量以及检测观察项目同实验一。检测指标：(1)整体检查，一般毒性反应，阴道开口时间(VO)和动情周期(2)RIA法检测血清激素水平：T，E2，FSH，TH；血清胆固醇水平(3)取出左侧新鲜的卵巢，10％的福尔马林固定，常规石蜡切片，光镜下观察组织学。(4)取右侧新鲜卵巢组织，制作卵巢组织匀浆，提取总RNA，用RT-PCR方法观察卵巢颗粒细胞基因StAR、CYPl7，CYP19，P450scc，3p-HSD,17-HSD mRNA的表达情况。
　　 结果：
　　 1、一般项目的检查：实验一及实验二DEHP染毒各组未见明显毒性反应，在实验一，与正常对照组比较，从PND21到PND63，低剂量组和高剂量组大鼠的平均体重均轻度下降，并且高剂量组体重下降明显。在实验二，平均体重无明显变化。
　　 2、青春期发育的改变。DEHP改变了雌性大鼠阴道开口的时期和第一次动情周期出现时的体重。实验一和实验二中，阴道开口时间和第一次动情周期均提前，在实验一，对照组、低剂量组、高剂量组大鼠阴道开口时间分别发生在PND32．0、30．3和PNDs29．7，在实验二，DEHP对阴道开口时间的影响与实验一类似。在实验一，对照组、地剂量组和高剂量组第一次动情周期分别出现在PND32．7、30．6HE29．8。在实验二，DEHP对第一次动情周期的影响与实验一类似。与对照组相比，实验一和实验二中大鼠阴道开口和第一次动情周期发生时的体重均为明显降低。
　　 3、动情周期，生殖内分泌改变，血清FSH、LH、T、E2的浓度。在实验二，与正常对照组(14％)及低剂量组(12％)比较，不规则动情周期在高剂量组(29％)出现更频繁(P<0．05)。在实验一，在动情间期处死动物，血清FSH、LH、E2浓度无明显改变，而血清睾酮浓度在DEHP染毒组呈降低趋势，但无统计学意义。在处死动物当天观察生殖内分泌状态(动情间期，动情前期和动情期)，通过卡方检验发现，DEHP不影响雌性大鼠内分泌状态。在实验二中，高剂量组血清E2(与对照组比较)和LH(与对照组和低剂量组比较)轻度升高。由于样本量较小，尚不能完全统计动情周期中各时期血清激素水平。
　　 4、血清胆固醇水平和编码卵巢雌二醇生物合成酶的基因水平表达量的改变。与正常组比较，DEHP暴露各组大鼠血清胆固醇水平在实验一中显著降低，而在实验二则显著升高。在实验一，高剂量组GYP19(aromatase)的mRNA水平显著升高，在实验二，各种基因mRNA表达量无显著差异。
　　 结论：
　　 DEHP对青春前期雌性大鼠染毒可使阴道开口和第一次动情周期提前，血清胆固醇、LH和雌二醇水平升高，不规则动情周期在高剂量组出现更频繁，DEHP染毒可能会使青春期提前并改变青春期后生殖系统功能。