CTN986动物体内代谢与药物动力学研究

摘要

槲皮素-3-O-β-D-呋喃芹菜糖-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，代号CTN986，是从无毒棉花籽中分离得到的具有抗抑郁活性的黄酮苷类化合物。该化合物对5HTzA受体有特异性结合，在小鼠强迫游泳实验中表现出良好的抗抑郁活性，是一个潜在的抗抑郁药(获国家发明专利，专利号：ZL99120216．3；已申请美国发明专利)。由于测定方法等方面的限制，黄酮苷的体内吸收问题多年来一直是争论的焦点。CTN986的高极性和强亲水性，使得其在体内代谢和药物动力学过程研究对于现有的分析方法是一种挑战。本论文目标是利用先进的分析手段，研究CTN986在动物体内的代谢和药物动力学过程，主要工作如下： 一、定量分析方法的建立 建立了测定动物血清、组织、胆汁、尿和粪样品中CTN986及其次级苷芦丁、陆地棉苷和苷元槲皮素的LC／MS／MS分析方法，并应用本法对CTN986在动物体内的代谢和药物动力学进行了研究。 CTN986、芦丁和陆地棉苷的检测：生物样品经固相萃取后，以甲醇一异丙醇一水一甲酸(20：10：70：0．1，v／v)为流动相，采用Zorbaxc8柱分离，电喷雾串联四极杆质谱检测。在正离子条件下通过多反应监测(MRM)方式进行扫描，分别选取待测物和内标的母离子进行二级质谱分析，所得碎片离子(CTN986：m／z743．4→303．1，芦丁：m／z611．2→303．1，陆地棉苷：m／z465．2→303．3和CTN987(内标)：m／z727．3→287．1)的色谱峰面积比用于定量分析。 槲皮素的检测：槲皮素和CTN986极性相差较大，因此选择了有机溶剂配比更高的流动相对槲皮素进行检测；另外槲皮素在负离子条件下的灵敏度高于正离子，因此选择在负离子条件下对其进行检测。生物样品经固相萃取后，以乙腈一甲醇一异丙醇一水一甲酸(20：16：8：56：0．08，v／v)为流动相，Zorbaxc8柱分离，用于定量分析的离子反应为m／z301→151(槲皮素)和m／z725→285(CTN987，内标)。 二、CTN986在小鼠体内的药物动力学研究 小鼠灌胃和静脉注射给予CTN986后，在血清中检测到CTN986，而未检测到其次级苷和苷元，说明CTN986能够以原形的形式被吸收入血。静脉注射给予CTN986后药物消除半衰期为0．26h，消除较快；灌胃给药后tmax值为0．5h，ti／2值为1．06h，表明小鼠口服CTN986后吸收迅速，消除也较快；灌胃给药后CTN986在小鼠体内的生物利用度很低(1．91％)。 灌胃给药后，CTN986在小鼠各主要组织中均有分布，其中以胃壁、肠壁中的药物浓度最高，各组织中药物消除较快，给药后3．5h几乎完全消除，表明该药物经口服给药后不易在体内产生蓄积。 三、CTN986在大鼠体内的药物动力学研究 大鼠灌胃和静脉注射给予CTN986后，在血清中检测到CTN986，而未检测到其次级苷和苷元。大鼠静脉注射给药后CTN986消除半衰期为0．23h，灌胃给药后药物消除半衰期为1．18h，药物消除较快；在大鼠体内的生物利用度很低(1．33％)。研究结果显示，CTN986在大鼠与小鼠体内的吸收动力学特点相类似，即吸收和消除均较快，绝对生物利用度很低。 大鼠静脉给予2．5mg／kgCTN986后48h，胆汁中CTN986累积排泄量为5．45±138μg，占给药剂量0．95±O．34％；给药后120h尿中CTN986累积排泄量为4．35±0．25μg，占给药剂量1．08±O．08％；静脉给药后粪中未检测到CTN986。 大鼠灌胃给予90mg／kgCTN986后22h，胆汁中CTN986累积排泄量个体差异较大，为17．34±18．53μg，占给药剂量0．¨9土0．139％；给药后48h尿中CTN986累积排泄量很低，为0．21士0．07μg，占给药剂量0．013±0．004％0；给药后24h粪中CTN986累积排泄量个体差异也很大，为17．97±19．45μg，占给药剂量O．114±O．123％。 上述结果表明CTN986静脉给药后主要经尿和胆汁排泄；口服给药后主要经胆汁和粪排泄，尿中累积排泄量很低。 四、CTN986在鼠体内的代谢研究 脱糖代谢是糖苷类化合物常见的代谢途径。本研究结果显示，大鼠和小鼠静脉注射或灌胃给予CTN986后，在血清、胆汁、尿和粪样中均未检测到其次级苷和苷元，没有发现CTN986在大鼠和小鼠体内的脱糖代谢情况。用β-葡萄糖苷酸水解酶和硫酸水解酶水解上述生物样品后，仍然没有检测到其次级苷和苷元，CTN986的含量也未见提高，表明鼠体内没有产生上述化合物的结合型代谢产物：葡萄糖苷酸结合物或硫酸结合物。而在大鼠和小鼠体内均发现了CTN986的一个主要代谢产物，即甲基化代谢物M1。对生物样品中M1进行半定量分析，发现其在组织样品和排泄样品中的含量均较高。 小鼠灌胃给予CTN986(80mg／kg剂量)后，M1在各主要组织中均有分布，其中以肠壁中M1的浓度最高；脾中M1浓度较高，脑和肾中M1浓度较低。与原形CTN986相比，M1在脾中的分布明显高于CTN986，在小鼠体内的消除较CTN986缓慢。 大鼠静脉给予2．5mg／kgCTN986后48h，胆汁中M1累积排泄量为97．95士27．10μg，占给药剂量17．03土4．71％，约为原形CTN986累积排泄量的20倍；静脉给药后120h尿中M1累积排泄量为6．65±1．48μg，占给药剂量1．65±0．39％，略高于原形药物的累积排泄量；静脉给药后粪中未检测到M1。上述结果表明静脉给予CTN986后以代谢产物M1的形式从胆汁中排出是其主要的排泄途径。 大鼠灌胃给予90mg／kgCTN986后22h，胆汁中M1累积排泄量个体差异较大，为322．25士345．58μg，占给药剂量2．21±2．60％，约为CTN986的20倍，亦远高于原形药物。 五、结论本论文揭示了CTN986在动物体内的代谢和药动学特征，相关分析方法的建立和成功应用，为黄酮苷类化合物的体内药物分析和药动学研究提供极具价值的启示。

目录

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摘要

第一章前言

第二章电喷雾-串联质谱技术在黄酮类化合物结构分析中的应用

第三章生物样品中CTN986及其次级苷和苷元定量分析方法的建立

第四章CTN986在小鼠体内的药物动力学研究

第五章CTN986在大鼠体内的药物动力学研究

第六章CTN986在鼠体内的代谢研究

第七章实验部分

第八章结论

参考文献

致谢

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