内蒙古白绒山羊角蛋白14(K14)基因启动子多态性及其与绒毛性状关联性

摘要

角蛋白14（Keratin14，KRT14，K14）作为哺乳类动物绒毛结构蛋白，与角蛋白5成对表达于表皮基底层细胞、绒毛及毛囊外根鞘细胞内,是覆层鳞状上皮的生物标记物。因此我们对内蒙古白绒山羊角蛋白14启动子进行了相关研究。
　　试验一：内蒙古白绒山羊角蛋白14启动子的克隆和分析。本试验以内蒙古白绒山羊DNA为模板，参照牛的角蛋白14序列设计和合成引物，通过PCR扩增获得长度为2834bp（登录号为JQ063036）,包括启动子区2631bp和结构基因第一外显子区203bp的内蒙古白绒山羊角蛋白14基因片段，对角蛋白14基因启动子结构进行了生物信息学分析，并与人和牛角蛋白14启动子序列做了比对。结果：山羊角蛋白14启动子结构与人角蛋白14启动子只含有Sox-5，GATA-1，GATA-1/2结合位点等3个共同的转录因子结合位点；但与牛的有较高的相似性，含有Sox-5，SRY，Cdx A，Myo D，MZF1，GATA-1/3，Nkx-2结合位点等7个共同的转录因子结合位点。
　　试验二：内蒙古白绒山羊角蛋白14基因单核苷酸多态性分析。①在对内蒙古白绒山羊角蛋白14启动子序列克隆的基础上，首先以20只山羊混合DNA为模板通过克隆测序寻找多态位点，结果发现引物 D2和D4扩增片段-421和-1838处出现套峰。②在-421和-1838处分别设计引物S1和S2，以150头内蒙古白绒山羊为研究对象，应用PCR-SSCP技术和DNA测序技术检测内蒙古白绒山羊角蛋白14启动子的分子变异。结果：引物S1扩增产物有AA、AG、GG3种基因型；引物S2扩增产物有CC、CT、TT3种基因型；克隆测序分析，发现-421和-1838位点分别发生了A→G和C→T的碱基突变。③群体遗传学表明：经χ2检验。-421（A→G）和-1838（C→T）位点上的SNP均处于Hardy-Weinberg(P>0.05)平衡状态，且均属中度多态。-421（A→G）位点AA型个体的绒厚显著低于GG型和AG型个体，GG型个体的绒长显著高于AA型个体；-1838（C→T）位点TT型个体的毛长和毛细度均显著高于CT型个体和CC型个体，其中TT型个体的毛长相对与CT对CC型个体更显著，毛细相对于CC对CT型个体更显著。

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插图和附表清单

1 引言

1.1 角蛋白概述

1.2 角蛋白14基因及其启动子研究进展

1.3 单核苷酸多态（SNPs）检测技术的进展

1.4 本研究的目的和意义

2 山羊角蛋白14（K14）基因启动子序列的克隆与及生物信息学分析

2.1 材料与方法

2.2 目的DNA的克隆与测序

2.3 生物信息学分析

2.4 结果与分析

2.5 讨论

2.6 结论

3 山羊角蛋白14基因的多态性及其与绒毛生产性状关联性

3.1 材料方法

3.2 结果与分析

3.4 讨论

3.5 结论

致谢

参考文献

作 者 简 介