抗乙酰胆碱受体单链抗体与人血清白蛋白融合基因真核表达载体的构建与表达

摘要

目的：构建真核表达体系，以提高抗人乙酰胆碱受体单链抗体(singlechainvariablefragment，ScFv)与人血清白蛋白(humanserumalbumin，HSA)融合基因的蛋白表达产量。方法：应用聚合酶链反应(PCR)扩增ScFv637-HSA融合基因，产物5'末端加“A”后克隆到中间载体pMD18-TSimpleVector，将重组载体转入大肠杆菌(E.coli)DH5α。经过测序确定阳性克隆后，用适当的限制性核酸内切酶酶切重组载体，酶切后的目的片段亚克隆至真核表达载体pPIC9K，构建重组载体pPIC9K-ScFv637-HSA，并将其转化至E.coliDH5α中，分离提纯重组载体后再经酶切、琼脂糖凝胶电泳检查以确认融合基因的正确性。将电泳检查后确认正确的pPIC9K重组载体经过限制性核酸内切酶SalⅠ线性化处理，之后电穿孔导入甲醇营养型毕赤酵母GS115中，提取酵母基因组DNA进行PCR，检测外源基因的插入情况。应用鼠抗c-myc单克隆抗体进行斑点杂交试验检查宿主菌中融合蛋白的表达。结果：电泳检查发现了大小分别为2600bp和9300bp的融合蛋白ScFv637-HSA基因和真核表达载体pPIC9K基因片段；且ScFv637-HSA基因已成功整合到毕赤酵母染色体基因组中。结论：成功构建了ScFv637-HSA融合基因的真核表达载体并对此融合基因的表达情况进行了初步鉴定，本实验为下一步鉴定融合蛋白活性及特异性奠定了基础。

目录

摘要

第一章前 言

第二章实验材料

第三章实验方法

第四章结果

第五章讨论

结论

参考文献

致 谢

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