荷叶生物碱镇静催眠、抗焦虑活性研究

摘要

荷叶为药食两用植物，其中的黄酮和生物碱等成分赋予了其降脂减肥、抑菌抗病毒等多种生理功能。但是，对荷叶神经活性的研究却鲜有报道。
　　通过空场实验、协同阈下(25 mg/kg)及阈上剂量(50 mg/kg)戊巴比妥钠睡眠实验，观察灌胃给予小鼠荷叶50％乙醇提取物(150、450 mg/kg)及总黄酮、总生物碱(TA)和低分子水溶物三个组分(30、90 mg/kg)对小鼠的镇静催眠作用，确定其活性组分。采用上述镇静催眠评价方法，以及明暗箱和空场实验，对比TA(10、20、40 mg/kg)给药1天和给药7天的镇静催眠、抗焦虑活性。应用UFLC-MS/MS检测小鼠脑组织中神经递质的水平。在此基础上，联合应用GABAA受体拮抗剂（印防己毒素、氟马西尼和荷包牡丹碱）和TA，观察对戊巴比妥钠催眠作用的影响。应用氯离子敏感的荧光探针MQAE检测TA对原代培养的大鼠小脑颗粒细胞内外氯离子流动的影响。
　　荷叶醇提物(450 mg/kg)和TA(90 mg/kg)均能显著降低小鼠的自主活动，增加戊巴比妥钠阈下剂量引起的小鼠入睡率，缩短阈上剂量所致的小鼠入睡潜伏期，延长睡眠时间。TA给药1次即可剂量依赖性的发挥镇静催眠作用，增加小鼠脑组织中GABA含量。TA(40 mg/kg)给药7天和给药1天相比较，其镇静催眠活性和脑组织中GABA水平显著下降。TA20 mg/kg给药1天和7天均能显著增加明室时间和空场实验中的中央区时间，给药1次即显著增加脑组织中5-HT、5-HIAA和DA水平;给药7天后5-HIAA/5-HT比值显著升高，DA含量进一步增加。除苯二氮卓位点拮抗剂氟马西尼外，GABAA受体氯离子通道阻断剂印防己毒素和GABA位点竞争性拮抗剂荷包牡丹碱均能拮抗TA协同戊巴比妥钠的催眠作用。TA可以打开小脑神经元GABA受体上的氯离子通道，增加氯离子的内流，引起细胞超极化。
　　生物碱是荷叶神经活性的物质基础，通过GABA能和单胺能神经系统发挥其镇催眠、抗焦虑作用，作用位点之一为GABAA受体的GABA位点。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 睡眠与觉醒

1．1．1 睡眠的两种时相

1．1．2 睡眠的发生

1．1．3 睡眠障碍与治疗

1．1．4 镇静催眠活性研究方法

1．2 焦虑

1．2．1 焦虑症的分类

1．2．2 焦虑症的发生机制

1．2．3 筛选与评价抗焦虑药物的动物模型

1．3 荷叶概述

1．3．1 荷叶的化学成分

1．3．2 荷叶的药理活性

1．4 本课题研究意义及主要内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 主要仪器

2．1．2 主要试剂

2．2 实验动物

2．3 实验方法

2．3．1 荷叶提取物的制备

2．3．2 实验动物品系及阳性药物的选择

2．3．3 荷叶提取物镇静催眠活性筛选

2．3．4 荷叶生物碱镇静催眠、抗焦虑活性评价

2．3．5 神经递质UFLC-MS／MS分析方法建立

2．3．6 荷叶生物碱镇静催眠、抗焦虑活性机制研究

2．3．7 数据处理

3 结果与讨论

3．1 荷叶提取物的分离制备和成分分析

3．1．1 荷叶提取物的制备

3．1．2 荷叶总黄酮和总生物碱的HPLC检测

3．1．3 荷叶生物碱的制备

3．1．4 荷叶生物碱主要成分含量分析

3．1．5 讨论

3．2 实验动物品系及阳性药物的选择

3．2．1 实验动物品系的选择

3．2．2 地西泮剂量的选择

3．2．3 讨论

3．3 不同荷叶提取物镇静催眠活性的比较

3．3．1 荷叶提取物对小鼠自主活动的影响

3．3．2 荷叶提取物对戊巴比妥钠催眠作用的影响

3．3．3 讨论

3．4 荷叶生物碱镇静催眠、抗焦虑活性评价

3．4．1 荷叶生物碱镇静催眠活性评价

3．4．2 荷叶生物碱抗焦虑活性评价

3．4．3 荷叶生物碱急性毒性

3．4．4 讨论

3．5 神经递质UFLC-MS／MS分析方法建立

3．5．1 神经递质UFLC-MS／MS检测方法

3．5．2 特异性

3．5．3 线性及最低检测限

3．5．4 精密度和重复性

3．5．5 稳定性

3．5．6 讨论

3．6 荷叶生物碱镇静催眠、抗焦虑活性机制研究

3．6．1 荷叶生物碱对小鼠脑组织中神经递质的影响

3．6．2 GABAA受体拮抗剂印防己毒素对荷叶生物碱催眠作用的影响

3．6．3 GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱对荷叶生物碱催眠作用的影响

3．6．4 GABAA受体拮抗剂氟马西尼对荷叶生物碱催眠作用的影响

3．6．5 荷叶生物碱对小脑颗粒细胞氯离子内流的影响

3．6．6 讨论

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢