卡托普利延迟起释型缓释片的研制、质量控制及其在Beagle犬内药代动力学研究

摘要

人体的血压在24小时呈现节律性变化：清晨醒后数小时内血压迅速升至峰值，半夜至凌晨降至谷值。多项临床研究显示，心肌梗死、心肌缺血、猝死、卒中等心脑血管事件均好发于清晨。治疗实践表明高血压病人最佳给药时间为凌晨2～3时左右。 卡托普利(captopril)，为含有巯基的血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)，临床用于各型高血压、心功能不全的治疗。其制剂除普通片剂、胶囊、注射液外，还有一日两次的卡托普利缓释胶囊和一日一次的缓释片剂上市，但没有针对高血压时间治疗的相关制剂。本课题以干压包衣技术研制了临睡前(晚上10：00)服用，次日凌晨3：00开始并持续释放有效剂量药物的卡托普利延迟起释型缓释片(以下简称卡托普利延缓片)，建立了质量控制方法，并以普通卡托普利缓释片为对照制剂，在beagle犬上按随机交叉设计进行药动学试验，考察所研制制剂的相对生物利用度及生物等效性情况。 1.卡托普利延缓片的研制目的：制备适用于临睡前服用，间隔4～6h后于次日凌晨开始释放药物并持续释放较长一段时间的卡托普利延缓片。方法：用干压包衣技术制备卡托普利延缓片，中心组合设计优化处方，人工神经网络预测释药时滞，在SAS上进行多元线性回归，并对优化结果进行验证，从而确定衣层处方。然后以卡托普利缓释片为对照制剂，以相似因子f2为筛选指标，确定片芯组成，从而确定最终处方。结果：所优化的卡托普利延缓片体外释药时滞为5h，开始释放后与对照制剂有良好的相似性(f2=64.06)，体外释放符合一级动力学规律。结论：以干压包衣技术制得包芯片，由衣层控制延迟释放的释药时滞，由衣层和片芯共同控制药物缓慢释放。 2.卡托普利延缓片的质量控制目的：对卡托普利延缓片质量进行控制。方法：采用高效液相色谱法进行质量控制，使用DiamonsilTMC18(150×4.6mm，5μm)，应用紫外吸收检测器，检测波长220nm，柱温采用40℃，进样量为20μL。其中含量测定和释放度检查以甲醇：水：磷酸=35：65：0.03为流动相，流速1.0mL/min；有关物质卡托普利二硫化物检查以甲醇：水：磷酸=45：55：0.025为流动相，流速1.5mL/min。释放度检查以0.1mol/L的盐酸溶液(人工胃液)750ml为释放介质，恒温(37±0.5)℃，采用转篮法，转速100r/min。结果：所采用方法专属性均良好。含量测定方法平均回收率为101.1﹪，日内RSD1.0﹪，日间RSD为1.1﹪，卡托普利浓度在26.25～48.75μg/mL范围内线性关系良好(r2=0.9994)，三批样品(030815-1、030902、030910)含量测定结果分别为101.3﹪、99.96﹪和99.26﹪；释放度测定方法平均回收率为99.91﹪，日内RSD0.49﹪，日间RSD为0.65﹪，卡托普利浓度在2.5～50μg/mL范围内线性关系良好(r2=0.9995)，三批样品(030815-1、030902、030910)5h累积释放约10﹪，开始释放后与普通卡托普利缓释片一致；有关物质检查方法平均回收率为100.9﹪，日内RSD0.83﹪，日间RSD为1.6﹪，卡托普利二硫化物浓度在2.25～13.5μg/mL范围内线性关系良好(r2=0.9998)，检测限为30ng/mL(S/N≥3)，定量限为100ng/mL(S/N≥10)(RSD=2.2﹪，n=5)，三批样品(030815-1、030902、030910)中卡托普利二硫化物检查结果含量分别为2.56﹪、2.53﹪和2.53﹪。结论：建立的质量控制方法专属性强，结果准确，重现性好，可有效地控制本品的质量。 3.固相萃取——柱前衍生HPLC法测定Beagle犬血浆中卡托普利的方法学研究目的：建立Beagle犬体内卡托普利血药浓度分析的方法。方法：以对溴苯甲酰甲基溴为衍生化试剂，血浆样品经衍生化反应后，用WatersOASISTMHLB固相萃取小柱从生物样本中提取纯化衍生化产物，先用5﹪甲醇水溶液冲洗，再用乙醚冲洗，抽干，最后用洗脱液1ml洗脱，收集洗脱液，抽干，残渣用流动相200μl溶解，取100μl注入HPLC仪；以DiamonsilTMC18为固定相，乙腈：0.25﹪醋酸溶液(40：60)为流动相，流速1mL/min，紫外检测波长λ258nm，外标法测定衍生物含量而确定卡托普利浓度。结果：血浆样品经预处理后在分离色谱条件下卡托普利衍生化产物tR在16min附近，峰形良好，对称因子1.01，与空白血样比较，血浆中内源性杂质不干扰卡托普利的测定，卡托普利衍生化产物与内源性杂质峰分离度大于2.0。测得卡托普利线性范围为10～500ng/mL，r=0.9999，方法检测限为5ng/mL(S/N≥3)，定量限为10ng/mL(S/N≥10)(RSD=7.3﹪，n=5)，该灵敏度可以满足Cmax的1/25药物浓度测定。方法回收率为95.04﹪～99.59﹪(n=15)，提取回收率为85.3﹪～86.9﹪(n=15)，日内精密度RSD为1.6﹪～3.1﹪(n=15)，日间精密度为0.70﹪～2.8﹪(n=15)。结论：建立了Beagle犬体内卡托普利血药浓度分析的方法，操作简单、快速，灵敏度高，结果准确，方法学研究结果和犬体内的预试验结果表明本法可满足犬体内卡托普利药代动力学研究要求。 4.卡托普利延缓片在Beagle犬的药代动力学和生物等效性研究目的：考察卡托普利延缓片在Beagle犬内的药代动力学情况，评价生物等效性。方法：取10条Beagle犬随机交叉、单剂口服试验制剂(本制剂)与参比制剂(卡托普利缓释片)，用建立的HPLC法测定给药后不同时间点血浆中卡托普利药物浓度，计算两制剂的药代动力学参数及相对生物利用度，并进行生物等效性评价。结果：卡托普利缓释片和延迟起释型缓释片在Beagle犬的主要药代动力学参数为：AUC0-∞分别为888.2±368.4和877.0±392.4ng·h·mL-1，AUC0-t分别为885.9±353.4和874.9±382.7ng·h·mL-1，tmax分别为2.5±1.72和3.5±1.08h，Cmax分别为232.5±90.19和309.4±196.3ng·mL-1，t1/2分别为2.68±0.67和2.26±0.56h。以卡托普利缓释片为参比，卡托普利延缓片相对生物利用度F0-t为101.5﹪±32.2﹪，F0-∞为101.5﹪±33.35﹪。结论：受试制剂与参比制剂的AUC0-tn比值的90﹪置信区间为82.0﹪～116.3﹪，符合药典规定范围(药典规定lnr1=80﹪，lnr2=125.0﹪)；Cmax比值的90﹪置信区间为90.65﹪～162.1﹪，超过了药典规定的上限值(药典规定lnr1=70﹪，lnr2=143.0﹪)。综观AUC和Cmax统计分析结果，仅Cmax上限超过药典规定值约13﹪，考虑到药典规定的是人体生物利用度限度，而动物与人体存在着种族差异，因此认为两种片剂基本等效。比较两种片剂的血药浓度-时间曲线，受试片服药后2h内血浆中检测不到药物，服药后3-5h血药浓度最大，而参比片服药后0.5h血浆中即可检测到药物，服药后最大血药浓度大多在0.75-3h，这一结果表明受试片在狗体内有明显的延迟起释作用，时滞时间约为2h。

目录

中文文摘

英文文摘

前 言

实验部分第一部分卡托普利延迟起释型缓释片的研制

实验部分第二部分卡托普利延迟起释型缓释片的质量控制

实验部分第三部分固相萃取—柱前衍生HPLC法测定beagle犬血浆中卡托普利的方法学研究

实验部分第四部分卡托普利延迟起释型缓释片在Beagle犬的药代动力学和生物等效性研究

全文小结

参考文献

综述：口服定时脉冲释药系统及其体内外研究进展

在读期间承担的项目和发表的论文

致 谢