胚胎干细胞体外分化肝细胞的研究及一种新型祖细胞的鉴定

摘要

目前，胚胎干细胞体外诱导为肝细胞的主要途径是通过拟胚体启动ES细胞分化，再通过细胞因子与胞外基质协同作用等方法完成肝细胞的发育与成熟。由于拟胚体法得到的细胞异质程度高而且分化周期长，不利于细胞移植治疗。因此，通过体外培养的ES细胞直接分化为肝细胞的研究已开始受到重视。本文利用试剂A(药品代号)诱导，在不经过拟胚体的情况下，直接将ES细胞诱导分化为肝细胞，并探讨了该诱导分化过程中出现的一种具有多分化潜能的祖细胞的性质与功能。实验分为两部分: 第一部分为ES细胞在试剂A作用下向一种AFP+/Nestin+/CK19+卵圆形样祖细胞的分化，并对这种祖细胞的性质进行鉴定。 第二部分为上述试剂A诱导分化而成的AFP+/Nestin+/CK19+祖细胞多方向分化潜能的鉴定。

目录

致谢

第一部分文献综述 胚胎干细胞定向分化为肝细胞的研究进展

1胚胎干细胞的定义

2胚胎干细胞的体内外定向分化研究

3胚胎干细胞定向分化研究存在的问题

4胚胎干细胞向肝细胞分化的研究

参考文献

第二部分实验研究 胚胎干细胞体我分化肝细胞的研究及一种新型祖细胞的临定

1材料

1.1细胞

1.2实验动物

1.3主要仪器

1.4主要试剂

1.5主要溶液的配制

1.6主要引物序列

2实验方法

2.1小鼠胚胎成纤维细胞MEF饲养层细胞的制备

2.2 ES细胞的培养和传代

2.3 ES-D3细胞分化

2.4祖细胞的鉴定

2.5分化肝细胞的鉴定

3结果

3.1 ES细胞的培养

3.2试剂A对ES细胞的诱导作用

3.3 AFP+/Nestin+/CK19+祖细胞的增殖及性质鉴定

3.4 AFP+/Nestin+/CK19+祖细胞向肝细胞的成熟

3.5 AFP+/Nestin+/CK19+祖细胞向胆管上皮细胞的分化

3.6 AFP+/Nestin+/CK19+祖细胞向神经细胞的分化

4讨论

4.1试剂A在ES-D3细胞分化过程中的作用

4.2 ES-D3细胞向AFP+/Nestin+/CK19+祖细胞的分化

4.3 AFP+/Nestin+/CK19+祖细胞的多方向分化潜能

5结论与创新

参考文献

附录：缩略词表

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