食源性单核细胞增多性李斯特菌的生物学特性

摘要

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是革兰氏阳性兼性胞内寄生菌,广泛存在于自然界和一些特定的环境中,如土壤、水、污水管等。上世纪80年代以来,该菌作为一种重要的食源性病原菌已引起广泛关注。Lm在食品生产和加工过程中可以通过多种途径进入食品,对消费者的健康构成潜在威胁。该菌具有很强的环境适应性,能够耐受的pH范围为4.0～9.5、温度范围为1～45℃;其耐盐能力也相当强,能在高于10％NaCl的环境中存活。这些环境适应性使其很难在食品加工生产过程中被完全杀灭,对食品安全性构成严重威胁。因此,在食品生产和加工过程中建立Lm简便、快速的检测方法及监控体系具有重要意义。本研究的目的是通过对浙江省某市海产品从生产到加工过程中Lm的污染状况进行检测,明确海产品中Lm的污染状况,并分析Lm分离株的毒力、耐药性和基因型。此外,我们还对两株典型单增李斯特菌奶源分离株毒力和环境适应性进行了研究。
　　 在浙江省某市5个海产品加工企业的虾和鱼制品及其原料和加工环境共采样482份,最终鉴定出8株单增李斯特菌,其检出率为1.7％。其中主要分离自成品鱼、成品虾。海产品分离株的毒力差异较大,可以分为强毒和弱毒两组。药敏试验结果表明:单增李斯特菌海产品分离株对常用的十五种抗生素表现出较强的敏感性,所有菌株均对四环素和喹诺酮类抗生素敏感;个别分离株对β-内酰胺类、复方新诺明、红霉素或克林霉素具有一定程度的耐药性,其中分离株1-16a具有多重耐药性(对庆大霉素、阿米卡星、头孢呋肟、复方新诺明、克林霉素均有抗药性)。
　　 用限制性内切酶SmaI对海产品分离株的基因组DNA酶切后进行脉冲场电泳分析,DNA条带数在8-12条之间,具有较好的分型性。聚类分析结果表明8个单增李斯特菌海产品分离株中有7个分属于2个PFGE亚型,分离株1-16a自成1个PFGE亚型。Lm1056,Lm1057和Lm6三个菌株分离自同一加工厂,其指纹图谱基本一致,属同一个克隆株系,Lm6为环境分离株,表明成品分离株Lm1056和Lm1057可能来自加工环境。
　　 两株单增李斯特菌奶源分离株H4和320在小鼠和鸡胚中的毒力不同,对小鼠的LD50分别为108.14和105.55,320株的毒力与参考菌株接近(105.49)。单增李斯特菌分离株可以在低温培养条件下稳步生长,8℃培养条件下分离株320和H4的生长速度基本一致,培养6天的活菌数比接种时分别增加1.48和2.05个Log;培养9天的活菌数比接种时分别增加2.41和3.34个Log。在12℃条件下分离株H4的生长显著慢于320株,培养2天,分离株320的活菌数比接种时增加3.41个Log,而H4株则增加1.77个Log(P＜0.05)。这些结果提示:消毒牛奶一旦受到环境中抗性和毒力较强的单增李斯特菌污染,可以对消费者健康构成潜在威胁。牛奶中的李斯特菌在12℃温度培养条件下能够比较快速生长,若保存牛奶的温度在8～12℃波动,其实际保质期将明显缩短。
　　 在8％NaCl条件下培养,两个分离株与参考菌株10403S的相对存活率的变化趋势基本一致。而在pH3.0条件下,分离株的相对存活率高于参考菌株10403S(P＜0.05)。pH(3.0～7.0)和NaCl(浓度范围0.5～10％)对单增李斯特菌的生长呈现交互作用,即随着NaCl浓度的增加和pH值的下降,细菌的生长速度逐渐减慢、滞后期渐长。上述结果表明,单增李斯特菌分离株的环境适应性比参考菌株10403S强。
　　 本试验通过对单增李斯特菌分离株的毒力、药敏性、环境适应性和PFGE分型等研究,为今后进一步开展该菌对食品污染的风险性评估和HACCP体系中关键控制点的建立奠定基础,对预防食源性李斯特菌病具有重要意义。