玫瑰花中原花青素的分离分析及抗氧化活性研究

摘要

玫瑰花是我国传统药材之一，《本草纲目拾遗》载：“玫瑰花活血、行血、健脾降火、理气调经、滋补养颜”，其养颜美容的功效被广泛接受。原花青素是具有极强抗氧化能力的多酚类物质，药理作用广泛，目前国外已制成多种药品、保健品、化妆品上市，是一种很有开发前途的天然抗氧化剂。本文主要研究玫瑰花中原花青素的提取及纯化工艺，并建立玫瑰花原花青素中单体和二聚体的HPLC分析方法，最后对玫瑰花原花青素的抗氧化能力进行评价。 本论文首先采用微波法从玫瑰花中提取原花青素，通过单因素实验考察了微波反应时间、反应次数和料液比对提取率的影响，最终确定提取条件为：60％乙醇为溶剂，料液比1:20，微波功率5.00V，微波反应时间20min，反应次数为1次，原花青素的提取率达到1.59％。并将微波法与传统溶剂浸提法进行了对比，结果表明微波法下原花青素的提取率高于溶剂浸提法. 继而采用大孔吸附树脂柱进一步纯化初提液，首先通过静态实验从五种树脂(D101、D1300、NKA，AB-8和NKA-Ⅱ)中筛选出适合纯化原花青素的树脂型号，以饱和吸附量和解吸率为指标综合考虑，结果显示：D101型树脂综合性能最好，其静态饱和吸附量为9.3mg/g湿树脂，解吸率为77.20％。论文进一步通过正交实验考察了纯化工艺参数，包括上样浓度、上样pH、洗脱液浓度、洗脱流速四个因素，以原花青素纯度和回收率为指标，极差分析和方差分析结果表明：上样pH是影响最显著的因素，最优纯化工艺条件为：上样浓度为1.25mg/ml，上样pH为2，洗脱液浓度为70％，洗脱流速为2ml/min。本文还对树脂纯化过程的动力学特征进行了初步探索，绘制了渗漏及洗脱曲线，并用数学方法将渗漏曲线拟合为y=1.18(e0.31x-e-0.79x)，由此方程积分可得出树脂的动态饱和吸附量即最大上样浓度。 论文进一步建立了玫瑰花原花青素中单体及二聚体的HPLC分析方法，具体色谱条件为：分析柱：EslipseXDB-C18，4.6mm×150mm，5μm；流动相：A：乙腈，B：1.0％冰醋酸(pH=2.71)；洗脱梯度：0-10min：5-10％A；10-100min：10-25％A；流速：1.0ml/min；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：20μl。在此条件下，四种物质(儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和原花青素B2)的分离度、方法的线性、精密度和加样回收率均符合要求。定量分析结果显示：原花青素B2的含量最高，达2.54％，表儿茶素含量为0.612％，表儿茶素没食子酸酯含量为0.257％。 论文最后将纯化得到的玫瑰花原花青素产品进行抗氧化活性研究，采用DPPH法测定其抗氧化能力，以维生素C为对照，实验测得原花青素对[DPPH·]的半抑制量EC50=0.053mg/ml，维生素C对[DPPH·]的半抑制量EC50=0.066mg/ml，结果表明：原花青素的抗氧化能力强于维生素C。

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致谢

引言

第一章 玫瑰花中原花青素的含量测定方法

1.1试剂和仪器

1.2实验方法

1.3结果与讨论

第二章 玫瑰花中原花青素的提取工艺研究

2.1实验试剂与仪器

2.2实验方法

2.2.1微波提取时间的选择

2.2.2微波提取次数的选择

2.2.3微波提取料液比的选择

2.2.4微波提取法与溶剂浸提法的比较

2.3实验结果

2.3.1微波反应时间的确定

2.3.2微波反应次数的确定

2.3.3料液比的确定

2.3.4微波萃取法与溶剂浸提法的比较

2.4讨论

2.5本章小结

第三章 玫瑰花原花青素的树脂纯化过程研究

3.1实验试剂与仪器

3.2实验方法

3.2.1原花青素粗品的制备

3.2.2大孔树脂的预处理

3.2.3树脂种类静态筛选

3.2.4纯化工艺参数优化

3.2.5吸附洗脱动力学研究

3.3实验结果与讨论

3.3.1树脂种类静态筛选

3.3.2纯化工艺参数优化

3.3.3吸附洗脱动力学研究

3.4本章小结

第四章 玫瑰花原花青素单体及二聚体的HPLC分析

4.1实验试剂与仪器

4.2实验方法和结果

4.2.1色谱条件的选择

4.2.2样品溶液的定性分析

4.2.3分析方法的验证

4.2.4样品含量测定

4.3本章小结

第五章 玫瑰花原花青素抗氧化活性的研究

5.1实验试剂及仪器

5.2实验方法

5.2.1 DPPH标准曲线的制作

5.2.2自由基残留率的测定方法

5.2.3半抑制量的测定和抗氧化能力的评价

5.3结果与讨论

5.3.1 DPPH标准曲线

5.3.2玫瑰花原花青素抗氧化能力的计算

5.3.3对照品VC抗氧化能力的计算

5.3.4玫瑰花原花青素与维生素C抗氧化能力的比较

5.4本章小结

结论

参考文献

作者简历