异丙酚对氨处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水通道蛋白-4表达以及细胞水肿的影响

摘要

目的：研究异丙酚对氯化铵处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水通道蛋白-4(AQP-4)表达和细胞水肿的影响以及相关的作用机制。
　　 方法：体外培养Sprague Dawley大鼠脑皮质星形胶质细胞。待细胞培养3-4周左右时，用细胞免疫荧光标记星形胶质细胞特异性蛋白神经胶质酸性蛋白，星形胶质细胞纯度达95％以上的细胞备用。实验分组第一步：正常对照组、氯化铵(5mM)处理星形胶质细胞6h、12h、24h、48h组。取AQP-4表达明显升高的一个时间点24h作为药物处理后检测AQP-4的时间点。第二步：正常对照组、氯化铵(5mM)处理星形胶质细胞0.5h、6h、12h、24h组。取p-p38表达明显升高的时间点0.5h作为药物处理后检测p-p38的时间点。第三步：正常对照组、氯化铵(5mM)组、溶剂(DMSO)对照组、p38特异性抑制剂SB203580(10μM)组、异丙酚(10μM)组。其中溶剂、p38特异性抑制剂和异丙酚均分别与氯化铵共培养星形胶质细胞。用细胞免疫荧光法检测培养的星形胶质细胞纯度；用光学显微镜观察各组细胞形态，用蛋白免疫印迹法(western-blot)检测AQP-4、p38和p-p38的表达情况。
　　 结果：①培养的星形胶质细胞的纯度为96.6％±1.4％。②氯化铵处理星形胶质细胞12h后，AQP-4蛋白表达较正常对照组明显增加(P<0.01)，一直持续到48h。③氯化铵处理星形胶质细胞后p38蛋白表达无明显变化；p-p38蛋白表达在氯化铵处理0.5h后较正常对照组明显增高(P<0.05)，在作用24h后p-p38表达仍明显升高。④光学显微镜观察发现氯化铵处理的星形胶质细胞较正常组细胞肿胀明显，异丙酚和p38抑制剂能减轻氯化铵引起的细胞肿胀程度。异丙酚和p38抑制剂处理组星形胶质细胞AQP-4和p-p38蛋白表达较氯化铵处理组降低(P<0.05)。p38蛋白表达在各组之间无明显统计学差异(P=0.341)。
　　 结论：异丙酚能抑制氯化铵引起的星形胶质细胞AQP-4的表达上调，减轻细胞的肿胀程度，其作用可能与抑制p38信号途径激活有关。

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综述 肝性脑病患者星形胶质细胞水肿机制的相关研究进展

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