茶黄素类(TFs)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

摘要

近年来，各种常见于老年人的神经退行性疾病，例如帕金森病(PD)，老年痴呆症等越来越引起人们的高度重视。目前关于PD的研究认为，PD症状的出现主要与中脑黑质内多巴胺能(doamine，DA)神经元变性导致的纹状体内多巴胺神经递质水平的降低有关，产生特异性病理指标路易氏体(Lewy body)。因此，提高中枢神经系统中DA的含量，保护DA神经元免受变性或者凋亡，恢复发生病变的神经系统，是PD预防和治疗的出发点。
　　 据研究发现，茶黄素类(TFs)具有很强的抗氧化性能，具有防癌、抗癌作用；直接或者间接的去除或者抑制自由基的产生；抑制脂质过氧化等多种活性。因此本研究通过建立神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的PD模型，分析TFs对可诱发PD症状的毒素6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡的预防作用。
　　 通过高效液相色谱(PHLC)分析样品TFs的成分，样品TFs的四种主要单体含量有81.89％；利用电子磁旋共振法(ESR)测试了样品TFs体外对超氧阴离子自由基的清除能力，终浓度为167μg/ml的样品TFs可以达到56.25％的清除率。
　　 通过实验建立了SH-SY5Y细胞的PD模型，包括6-OHDA的浓度定为100μM，样品TFs的安全浓度范围定为25μg/ml以下，TFs的预处理时间为3 h。
　　 通过建立的SH-SY5Y细胞的PD模型，研究了TFs对于6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡的影响，MTT和SRB结果发现低浓度的TFs可以有效的预防6-OHDA造成的SH-SY5Y细胞活性的降低，尤其是0.5μg/ml的TFs，在MTT和SRB试验中，相对于6-OHDA损伤组，将SH-SY5Y细胞活性分别提高了48.35％和36.18％；荧光显徼镜观察TFs对6-OHDA诱导的细胞凋亡的形态变化也有很大的抑制作用；线粒体膜电位的测定结果显示，TFs可以有效抑制6-OHDA造成的线粒体膜电位降低，0.5μg/ml的TFs对比损伤组可将线粒体膜电位提高39.81％；细胞内一氧化氮(NO)水平的测定认为TFs可以有效的抑制6-OHDA造成的细胞内NO含量的增加，0.5μg/ml的TFs对比损伤组可以使细胞内NO含量降低45.38％。
　　 本实验从细胞水平上初步验证了TFs对于6-OHDA诱导的神经细胞凋亡的抑制作用，说明对PD的症状具有一定的预防作用，为PD的预防和治疗开辟了新的方向。