P44/42 MAPK细胞信号传导通路在女性压力性尿失禁患者尿道支撑组织中的表达和意义

摘要

背景和目的：
　　 压力性尿失禁(stressurinaryincontinence，SUI)指腹压增加时尿液不自主溢出，是一种严重影响生活质量的中老年妇女常见慢性病，分娩损伤和雌激素水平低下是该病发病的两大诱因，然而其发病机制迄今未明。目前较公认的SUI发病机制相关学说--盆底整体理论和吊床假说认为，阴道前壁等尿道支撑组织的结构和功能缺陷导致了该病的发生。尿道支撑组织主要成分为结缔组织，由大量细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)和少量细胞组成；其中，成纤维细胞在介导以胶原为主要成分的ECM代谢中占据核心地位，但具体调控途径不明。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases，MAPKs)细胞信号传导通路是细胞应激和损伤反应的主要信号通路，该酶同时也是雌激素受体细胞信号传导通路主要激酶；其中，P44/42MAPK信号通路在人体许多组织成纤维细胞的分化、增殖以及合成ECM的过程中发挥关键作用。本研究拟通过采用免疫组化法观测女性尿道支撑组织磷酸化P44/42MAPK(p-P44/42MAPK)的定位表达，采用Westernblot法观测SUI患者与非SUI患者之间尿道支撑组织p-P44/42MAPK的表达差异，明确尿道支撑组织p-P44/42MAPK表达与SUI发病的相关性；同时，通过女性尿道支撑组织成纤维细胞体外实验，采用RT-PCR和Westernblot法观测P44/42MAPK特异性抑制剂干预对成纤维细胞合成胶原量的影响，探讨P44/42MAPK细胞信号传导通路在SUI发病机制中的作用。
　　 方法：
　　 1、临床实验：收集浙江大学医学院附属妇产科医院2010年1月至2011年1月收治的10例SUI患者(SUI组)和10例非压力性尿失禁妇女(对照组)的阴道前壁组织(即尿道支撑组织)，所有组织标本来源于SUI患者行抗尿失禁手术时和非SUI患者因阴道前壁囊肿或宫颈癌手术时，取材于官颈外12下方1cm-2cm处约0.5*1cm2的阴道前壁全层组织。采用免疫组化EnVision染色法检测组织中p-P44/42MAPK蛋白表达的定位，采用Westernblot法检测组织中p-P44/42MAPK蛋白表达水平，比较SUI组和非SUI组之间尿道支撑组织p-P44/42MAPK蛋白表达的差异。
　　 2、细胞实验：用女性尿道支撑组织的新鲜标本组织块进行纤维细胞培养，体外构建女性尿道支撑组织成纤维细胞模型，予或不予P44/42MAPK特异性抑制剂PD98059干预，采用RT-PCR和Westernblot法，检测Ⅰ/Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达水平，比较PD98059干预对成纤维细胞合成胶原量的影响。
　　 结果：
　　 1、免疫组化EnVision染色结果证实女性尿道支撑组织成纤维细胞、鳞状上皮细胞、血管内皮细胞中存在p-P44/42MAPK蛋白强表达，以细胞核和细胞质表达为主。
　　 2、经t检验和x2检验，SUI组和对照组两组之间患者年龄、产次、分娩方式、绝经与否和体重指数均无显著性差异；对照组尿道支撑组织p-P44MAPK蛋白和p-P42MAPK蛋白表达量分别为71.93±15.01和76.54±15.32；SUI组尿道支撑组织p-P44MAPK蛋白和p-P42MAPK蛋白表达量分别为21.65±7.04和40.44±18.95，经t检验，SUI组尿道支撑组织p-P44MAPK和p-P42MAPK蛋白表达量均显著下降(p均<0.05)。
　　 3、PD98059干预前，体外培养的女性尿道支撑组织成纤维细胞Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量分别为9.82±0.13和12.08±0.95，Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达量分别为8.16±0.11和13.72±1.47；PD98059干预后，体外培养的成纤维细胞Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达量分别为7.08±0.11和8.68±0.84，Ⅲ胶原的mRNA和蛋白表达量分别为6.00±0.07和10.94±1.76；经t检验，P44/42MAPK特异性抑制剂PD98059干预后，成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ胶原的mRNA和蛋白表达量均显著下降(p均<0.05)。
　　 结论：
　　 1、女性尿道支撑组织存在磷酸化P44/42MAPK；
　　 2、SUI患者尿道支撑组织中磷酸化P44/42MAPK蛋白表达水平明显降低，提示P44/42MAPK细胞信号通路与SUI发病相关；
　　 3、P44/42MAPK特异性抑制剂PD98059干预后，体外培养的女性尿道支撑组织成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达量明显下降，推测P44/42MAPK细胞信号通路参与SUI发病的机制可能与该通路活性下调、引起成纤维细胞介导的胶原合成减少、导致细胞外基质代谢障碍有关。