视网膜神经节细胞放射损伤后miRNAs的差异表达及靶基因预测

摘要

目的：研究不同剂量的X放射线对视网膜神经节细胞(RGCs)生存率的影响;初步筛查X放射线照射后的RGCs中差异表达的miRNAs，并预测其靶基因。
　　方法：用0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy的X放射线照射生长24h的RGCs，每日在倒置相差显微镜下观察各组细胞的密度和形态变化。MTT法检测照射后第5天各组RGCs的存活率。应用miRNA芯片检测6Gy和0GyX放射线照射后第3天的RGCs中差异表达的miRNAs。qRT-PCR验证芯片结果的准确性。应用Trgetscan和microRNAorg两种靶基因预测软件预测表达差异较明显的5种miRNAs的靶基因。
　　结果：X线照射后前4天各组的细胞密度和细胞形态均无明显差别，但第5天，4Gy、6Gy和8Gy照射组的细胞密度降低，细胞形态也发生了变化。MTT示4Gy、6Gy和8Gy照射组的细胞存活率比0Gy对照组明显降低(p＜0.01)。miRNA芯片结果显示6Gy照射组中差异表达的miRNAs有37个，其中上调的有16种，下调的有31种。其中6种miRNAs（miR-192、-34a*、-877、-34c、-34a、-22）上调1.5倍以上，6种miRNAs（miR-212、-338、-219-5p、-503、-210、miR-505*）下调至0.667倍以下。qRT-PCR证明芯片的结果可靠。靶基因软件预测的5种miRNAs的靶基因参与细胞生长、发育、分化、凋亡和抗凋亡等过程。
　　结论：4Gy、6Gy、8Gy的X放射线能造成RGCs损伤;总剂量6GY的X放射线能够引起RGCs中一些miRNAs的表达变化;差异表达的miRNAs可能通过调控其靶基因参与在RGCs的放射损伤过程中。

目录

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致谢

摘要

英文缩略语

1 引言

2 材料与方法

2．1 细胞培养和处理

2．2 MTT比色法

2．3 RNA提取及检测

2．4 miRNA芯片

2．5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证miRNA芯片结果

2．6 统计学处理

3 结果

3．1 X放射线对RGCs密度和形态的影响

3．2 X放射线对RGCs存活率的影响

3．3 miRNA芯片结果

3．4 qRT-PCR验证

3．5 靶基因预测

4 讨论

4．1 X放射线对RGCs的损伤机制

4．2 X放射线对miRNAs表达的影响

4．3 miRNAs在眼部组织中的表达

4．4 miRNA的靶基因预测及功能分析

4．4 miRNAs在疾病诊断、治疗中的应用

参考文献

综述 microRNAs与眼部相关性疾病

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