声明
致谢
摘要
1 绪论
1.1 引言
1.2 里氏木霉纤维素酶体系
1.3 其它来源的纤维素酶
1.4 外源蛋白在里氏木霉中的表达
1.4.1 里氏木霉的基因工程策略
1.4.2 里氏木霉的转化策略
1.4.3 里氏木霉的基因定向整合
1.4.4 定向整合的RNA工具
1.4.5 里氏木霉基因工程综合策略
1.5 里氏木霉的基因表达调控
1.5.1 纤维素酶的诱导物
1.5.2 里氏木霉对不溶性底物的识别
1.5.3 纤维素酶启动子的结构
1.5.4 纤维素酶的转录调控
1.5.5 调节纤维素酶表达的信号途径
1.6 里氏木霉胞外蛋白的分泌途径
1.6.1 通往内质网的途径
1.6.2 内质网中的蛋白成熟
1.6.3 内质网质量控制
1.6.4 后内质网途径
1.6.5 蛋白质糖基化
1.7 cbh2基因工程研究进展
2 里氏木霉cbh2基因的克隆与在大肠杆菌中的表达
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 质粒与菌株
2.2.2 工具酶与试剂
2.2.3 培养基
2.2.4 实验仪器
2.2.5 里氏木霉cbh2基因的克隆与重组质粒的构建
2.2.6 大肠杆菌的转化
2.2.7 里氏木霉cbh2基因在大肠杆菌中的表达
2.2.8 测定方法
2.3 结果与讨论
2.3.1 反转录PCR获得里氏木霉cbh2基因
2.3.2 克隆载体的酶切验证
2.3.3 表达载体的PCR验证
2.3.4 里氏木霉cbh2基因序列分析
2.3.5 里氏木霉cbb2在大肠杆菌中的诱导表达
2.4 小结
3 里氏木霉cbh2基因在毕赤酵母中的表达
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 质粒与菌株
3.2.2 工具酶与试剂
3.2.3 培养基
3.2.4 实验仪器
3.2.5 毕赤酵母表达载体的构建
3.2.6 大肠杆菌的转化
3.2.7 里氏木霉cbh2基因在毕赤酵母中的表达
3.2.8 测定方法
3.2.9 统计学分析
3.2.10 CBH Ⅱ蛋白结构的预测与模拟
3.3 结果与讨论
3.3.1 毕赤酵母表达载体的构建与PCR验证
3.3.2 重组毕赤酵母的诱导与发酵
3.3.3 重组蛋白的SDS-PAGE
3.3.4 重组CBH Ⅱ的酶学性质研究
3.3.5 CBH Ⅱ蛋白结构的预测与模拟
3.4 小结
4 里氏木霉转化方法与转化子筛选方法的建立与优化
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 质粒与菌株
4.2.2 工具酶与试剂
4.2.3 培养基
4.2.4 实验仪器
4.2.5 重组质粒pCAMBIA1300-hph-PsCT的构建
4.2.6 大肠杆菌的转化
4.2.7 根瘤农杆菌介导的里氏木霉转化
4.2.8 里氏木霉转化子的筛选与鉴定
4.2.9 产酶实验
4.2.10 测定方法
4.3 结果与讨论
4.3.1 重组质粒pCAMBIA1300-hph-PsCT的构建
4.3.2 农杆菌介导转化过程的优化
4.3.3 农杆菌转化子所含质粒的酶切验证
4.3.4 里氏木霉转化子的遗传稳定性检验及PCR验证
4.3.5 里氏木霉筛选方法的建立
4.3.6 里氏木霉转化子生长速率与酶活的关系
4.4 小结
5 里氏木霉转化子的产酶研究
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1 菌株
5.2.2 试剂
5.2.3 实验仪器
5.2.4 培养基
5.2.5 产酶实验
5.2.6 测定方法
5.3 结果与讨论
5.3.1 纤维二糖水解酶活力对比
5.3.2 滤纸酶活力对比
5.3.3 内切葡聚糖酶活力对比
5.3.4 纤维二糖酶活力对比
5.4 小结
6 里氏木霉纤维素酶降解木质纤维素的研究
6.1 引言
6.2 材料与方法
6.2.1 菌株
6.2.2 酶制剂
6.2.3 实验仪器
6.2.4 培养基
6.2.5 产酶实验
6.2.6 木质纤维素降解
6.2.7 分析方法
6.3 结果与讨论
6.3.1 酶用量对碱处理玉米秸秆和稻草的影响
6.3.2 添加纤维二糖酶的碱处理玉米秸秆和稻草酶水解
6.3.3 添加纤维二糖酶和木聚糖酶的碱处理玉米秸秆和稻草酶水解
6.3.4 不同来源纤维素酶酶解得率的比较
6.4 小结
7 结论与展望
7.1 结论
7.2 展望
7.3 论文的创新点
参考文献
作者简历
攻读博士学位期间发表的论文