三没食子酰基葡糖(TGG)分离鉴定及高TGG茶树资源筛选

摘要

没食子酰葡糖是许多中草药的重要功能成分，但普通茶叶中因含量较低，该类物质尚未受到重视，相关研究报道极少。本研究在前期已发现了高含量没食子酰葡糖类化合物茶树新资源的基础上，从分离纯化该目标物入手，通过UPLC/MS/MS以及NMR等手段鉴定其结构和抗氧化能力，并利用建立的UPLC/MS/MS检测方法对收集的茶树资源新梢中该目标化合物以及儿茶素类物质进行了定量分析，主要结果如下:
　　(1)采用200-300目硅胶制板、正丁醇/水(3/1)层析，在薄板第3区段回收到了纯度较高、基本不含EGCG和ECG的目标物;经UPLC/MS分析显示，该化合物在紫外区的219nm和278nm附近有两个吸收峰，相对分子量为636，在ES-模式下具有m/z169、313、465和483等离子碎片。以YMC-Pack ODS-A制备柱为固定相、采用含乙酸和乙腈的水溶液为流动相，通过优化梯度洗脱条件获得了高纯度(＞97％)目标化合物;经1H-NMR、13C-NMR证实该目标物为2，3，6-三没食子酰基葡糖(TGG)，分子式为C27H24O18。
　　(2)经ORAC自由基清除等三种抗氧化体系测定，TGG抗氧化能力显著强于抗坏血酸，但略低于EGCG。
　　(3)与ES+相比，ES-模式更适合于儿茶素类和TGG检测;锥孔电压在20-30v时可获得较强子离子信号，儿茶素类中的差向异构体的子离子碎片基本一致，具有没食子酰基的化合物均具有m/z169子离子信号;在此基础上，建立和优化了TGG和儿茶素类UPLC/MS/MS定量方法，并对190余份新资源进行了采样分析，获得了TGG含量在30mg/g以上的材料8份，其中材料FZ1和FZ2新梢TGG含量在40-50mg/g之间、材料1-017和1-018新梢TGG超过50mg/g;筛选还获得了EGCG含量超过140mg/g的资源2份，儿茶素类总量超过230mg/g的资源4份。研究还显示，随着新梢成熟度增加，FZ2中TGG含量下降、EGCG等上升，说明两者在代谢上可能存在一定的消长关系。

目录

声明

致谢

摘要

第一章 文献综述

1．1 没食子鞣质研究现状

1．1．1 没食子鞣质的概念及来源

1．1．2 没食子鞣质的性能

1．2 茶叶中酚类物质分离纯化技术

1．2．1 溶剂萃取

1．2．2 离子沉淀

1．2．3 树脂吸附分离

1．2．4 超临界流体萃取

1．2．5 高速逆流色谱

1．2．6 其它辅助手段

1．3 液质联用在茶叶成分测定中的应用

1．3．1 液质联用技术特点

1．3．2 液相色谱-电喷雾串联质谱在茶叶成分分析中的应用

1．3．3 液相色谱与其他质谱串联在茶叶成分分析中的应用

1．4 本研究的目的、意义及主要内容

1．4．1 研究目的及意义

1．4．2 主要研究内容

第二章 没食子酰基葡糖物质提取纯化和结构鉴定

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．2．1 材料

2．2．2 目标物质提取

2．2．3 薄板层析纯化

2．2．4 制备色谱纯化

2．2．5 HPLC分析

2．2．6 UPLC／MS／MS分析

2．2．7 化合物结构鉴定

2．3 结果与分析

2．3．1 目标物浸提效果

2．3．2 薄板层析对目标物纯化效果

2．3．3 制备色谱法纯化效果

2．3．4 目标化合物结构鉴定

2．4 小结

第三章 2，3，6-三没食子酰葡糖抗氧化性能研究

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．2．1 试验材料

3．2．2 主要溶液配置

3．2．3 ORAC自由基清除检测

3．2．4 DPPH自由基清除检测

3．2．5 总抗氧化能力(FRAP)测定

3．3 结果与分析

3．3．1 2，3，6-TGG对AAPH自由基的清除效果

3．3．2 2，3，6-TGG对DPPH自由基清除效果

3．3．3 2，3，6-TGG总抗氧化能力

3．3．4 三种抗氧化能力相关性分析

3．4 小结

第四章 高TGG茶树资源筛选

4．1 引言

4．2 材料与方法

4．2．1 材料

4．2．2 样品准备

4．2．3 儿茶素类和TGG LC／MS／MS检测方法建立和优化

4．2．4 不同茶树材料TGG等成分检测

4．3 结果与分析

4．3．1 儿茶素类和TGG质谱参数分析结果

4．3．2 儿茶素类和TGG色谱分析条件优化

4．3．3 茶树材料儿茶素类和TGG含量分析结果

4．3．4 嫩度对新梢TGG含量的影响

4．4 小结

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

参考文献

附录A 缩写词说明

附录B 图表索引

附录C 作者简历