抑制法尼基焦磷酸合成酶改善心脏重塑作用的研究

摘要

第一部分:法尼基焦磷酸合成酶抑制剂改善心肌肥厚并影响连接蛋白重塑
　　研究背景:
　　心肌肥厚是心脏疾病中的一种病理改变，其可能与机体过度激活的神经内分泌体系和内环境失稳密切相关。心肌持续而过度的肥厚反应将最终导致心脏功能减退及慢性充血性心力衰竭。在心衰形成的整个过程中，心脏重构是一个动态发展的过程，其间涉及到细胞凋亡、纤维化、脂肪堆积、线粒体异常、离子通道改变及信号转导通路的变化等。
　　以往的研究表明，法尼基焦磷酸合成酶（famesyl pyrophosphate synthase，FPPS）是甲羟戊酸途径中的一种关键酶，其催化合成下游产物法尼基焦磷酸(Farnesylpyrophosphate，FPP)和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(Geranylgeranyl pyrophosphat，GGPP)所参与的信号转导通路直接参与心肌肥厚及心脏重构的发生。心肌细胞的纤维化是心脏重构中及其重要的特征，但其他如肌钙蛋白、缝隙连接蛋白等的变化也间接地反应了心肌重构的程度与趋势。
　　目的:
　　探讨法尼基焦磷酸合成酶抑制剂在腹主动脉缩窄术所致心肌肥厚的动物模型中心肌重构的影响与作用。
　　方法:
　　1.腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚大鼠模型并观察手术效果;
　　2.将腹主动脉缩窄术后雄性SD大鼠随机分为3组:腹主动脉缩窄术组、腹主动脉缩窄术加药物组和假手术对照组。分别给予生理盐水10mg/kg/day或阿伦磷酸钠10mg/kg/day灌胃维持3、5、8周。
　　3.运用超声、血流动力学等手段检测大鼠组织形态学变化;
　　4.胫骨尺测量大鼠左侧胫骨长度;
　　5.高效液相色谱法(HPLC)技术对大鼠心肌组织中FPP和GGPP含量进行检测;
　　6.用BNP检测试剂盒检测大鼠血液样本中的BNP含量;
　　7.对大鼠心肌组织切片染色并对I型纤维胶原蛋白(Col-Ⅰ)、T型肌钙蛋白(t-TnT)及缝隙连接蛋白(cx43)等进行免疫组化分析。
　　结果:
　　1.腹主动脉缩窄术导致大鼠心肌肥厚并增加心肌组织中FPP及GGPP的含量;
　　2.FPPS抑制剂可部分改善心肌肥厚表现，同时心肌组织中FPP及GGPP含量下降;
　　3.心肌肥厚中大鼠胫骨长度及血BNP水平无明显变化;
　　4.心肌重构中心肌纤维化、肌钙蛋白及缝隙连接蛋白等发生改变，抑制FPPS可以部分逆转这种重构表现。
　　结论:
　　FPPS参与了心肌肥厚及重塑的发生、发展;抑制FPPS的活性可以部分改善心肌肥厚。
　　第二部分:法尼基焦磷酸合成酶抑制剂阿伦磷酸钠对心肌肥厚大鼠中RhoA通路影响的研究
　　研究背景:
　　心脏重塑是心肌肥厚发生与发展中重要的病理过程，并以心力衰竭为最终结局。很多研究表明被激活的RhoA/ROCK通路及其相关蛋白会介导心肌肥厚及细胞凋亡的发生。Rho激酶属于小G蛋白（蛋白激酶A，GC）家族的丝氨酸/苏氨酸激酶，可以通过其下游靶效应分子，进一步调节ROCK，这些蛋白的调节可以对细胞收缩、黏附、迁移和增殖等多种生物学行为产生影响。而已知的事实是，RhoA/Rock信号通路在心室重塑过程中起着上调炎性细胞因子，抑制心肌收缩，促进心肌肥大与凋亡等作用。研究表明，阿伦磷酸钠是经典的FPPS抑制剂，其通过抑制FPP、GGPP的生成进而影响RhoA/Rock信号通路的转导达到改善心肌肥厚及纤维化等的病理过程。法尼基焦磷酸合成酶(FPPS)可能是治疗心肌肥厚和改善心脏重构的新思路。
　　目的:
　　探讨FPPS抑制剂在改善心肌肥厚及重塑时可能的RhoA通路机制。
　　方法:
　　1.腹主动脉缩窄术建立心肌肥厚大鼠模型;
　　2.将雄性SD大鼠分为3组:腹主动脉缩窄术组、腹主动脉缩窄术加药物组和假手术对照组。分别给予生理盐水10mg/kg/day或阿伦磷酸钠10mg/kg/day灌胃维持3、5、8周。
　　3.运用超声、血流动力学等手段检测大鼠的组织形态学变化;
　　4.高效液相色谱法(HPLC)技术对大鼠心肌组织中FPP和GGPP含量进行检测;
　　5.RhoA试剂盒测定心肌组织中RhoA在490nm处的OD值;
　　6.免疫蛋白印记检测心肌组织中FDPS、RhoA及p-ERK1/2的蛋白含量。
　　结果:
　　1.抑制FPPS可改善心肌肥厚及心脏重塑;
　　2.抑制FPPS可降低心肌组织中FPP、GGPP含量;
　　3.抑制FPPS可降低心肌组织中RhoA含量;
　　4.抑制FPPS可通过抑制RhoA相关通路的蛋白活性抑制心肌肥厚与心脏重塑。
　　结论:
　　抑制FPPS可通过抑制RhoA通路上蛋白的表达从而改善心肌肥厚及心脏重塑;FPPS抑制剂可能是治疗心肌肥厚的新思路。

目录

声明

致谢

摘要

第一部分：法尼基焦磷酸合成酶抑制剂改善心肌肥厚并影响连接蛋白重塑

1 引言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

5 结论

实验的创新

附件

参考文献

第二部分：法尼基焦磷酸合成酶抑制剂阿伦磷酸钠对心肌肥厚大鼠中RhoA通路影响的研究

1 引言

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

5 结论

实验的创新

实验的不足

参考文献

综述 缝隙连接与心肌肥厚

作者简介及科研成果