热激蛋白Cpn10通过结合NPAT来调控组蛋白转录和细胞周期

摘要

NPAT是体内cyclinE-Cdk2激酶的底物。它定位于细胞核内一种称为Cajal Body的核细胞器上，在哺乳动物细胞周期里组蛋白转录的激活过程中起关键作用。我们以NPAT为诱饵进行酵母双杂交实验，发现了一个新的NPAT相互作用蛋白Cpn10。免疫共沉淀结果显示，Cpn10与NPAT通过一个保守的LFD motif直接相互作用。二者在细胞核的Cajal Body上有部分共定位。一旦Cpn10的表达受到抑制，NPAT在Cajal Body的定位随之消失，但并不影响Cajal Body的形成。此外，我们还发现Cpn10与NPAT一样，在组蛋白基因的转录过程中至关重要。抑制Cpn10的表达导致组蛋白转录显著下调，而过表达则促进组蛋白的转录。Cpn10对组蛋白的调控作用最终又表现在对细胞周期和细胞增殖的影响上，下调Cpn10会使细胞阻滞在S期，而且会明显抑制细胞增殖和克隆形成，而上调则对此有显著的促进作用。综上所述，我们发现了一个新的调控细胞周期的关键因子Cpn10，它在稳定NPAT核内定位进而激活组蛋白基因的转录中起着重要作用。

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致谢

摘要

英文缩略词

前言

1 实验材料

1．1 细胞系、菌株

1．2 抗体

1．3 主要化学试剂和耗材

1．4 实验仪器

1．5 主要溶液配制

2 实验方法

2．1 重组质粒的构建

2．2 重组质粒的筛选和鉴定

2．3 细胞实验

2．4 蛋白检测

2．5 免疫荧光

2．6 细胞周期同步化

2．7 PI染色法检测细胞周期

2．8 实时定量PCR(Q-PCR)

2．9 克隆形成能力及鉴定

2．10 MTS测定细胞增殖

3 实验结果

3．1 Cpn10与NPAT相互作用

3．2 Cpn10的LFD motif对于Cpn10-NPAT的相互作用至关重要

3．3 NPAT在细胞核内的聚集依赖于Cpn10

3．4 Cpn10是组蛋白基因转录所必需的

3．5 Cpn10增强细胞增殖

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 NPAT在组蛋白表达调控中的作用及其研究进展

作者简历及在读期间所取得的科研成果