樱桃果肉中抗氧化和免疫调节活性物质的分离与结构鉴定

摘要

我国樱桃栽培历史悠久，种质资源丰富，目前果树产业栽培的有甜樱桃（Prunus avium）、酸樱桃（Prunus cerasus）、中国樱桃（Prunus pseudocerasus）和毛樱桃（Prunus tomentosa）。本论文对四种樱桃的果实品质、物质组成、抗氧化和免疫调节活性进行了评估，主要结果如下:
　　1.在本研究所用的4种樱桃共8个品种中，果实品质和物质组成具有显著的种间差异。结合HPLC和质谱方法，共鉴定出25种酚类物质，包括5种羟基桂皮酸类物质、2种黄烷-3-醇、7种花色苷和11种黄酮醇;2个甜樱桃和2个酸樱桃品种酚类物质以花色苷（主要是矢车菊素糖苷）为主;中国樱桃的黄酮醇种类丰富;毛樱桃以黄酮醇（主要是槲皮素鼠李糖苷和山奈酚鼠李糖苷）为主;
　　2.对樱桃果肉进行系统分离，并评估了4种樱桃果肉中酚类提取物、脂溶性提取物和水溶性多糖的抗氧化和免疫调节活性，结果表明:酚类物质是樱桃中最主要的抗氧化成分;樱桃水溶性多糖能诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7的活化，其活性由高到低依次为‘黑珍珠’＞‘黑皮’＞‘红毛樱桃’＞‘奥德’;
　　3.将甜樱桃‘黑珍珠’的酚类物质进一步分离，得到富含花色苷、羟基桂皮酸和黄酮醇的组分，分别对3种组分及其主要单体化合物进行活性评估，结果表明:矢车菊素芸香糖苷对抗氧化活性的贡献率最大;富含羟基桂皮酸的组分能抑制多糖诱导的RAW264.7细胞NO释放;单体化合物中，矢车菊素葡萄糖苷、绿原酸和山奈酚芸香糖苷能不同程度地抑制甜樱桃多糖诱导的RAW264.7细胞活化，其中山奈酚芸香糖苷活性最高;
　　4.将甜樱桃‘黑珍珠’的水溶性多糖进一步分离纯化，得到2种分子量均一的多糖PAPS-1和PAPS-2，根据单糖组分分析、红外光谱扫描、甲酯化度和乙酰化度分析、高碘酸氧化-Smith降解、1H-NMR和13C-NMR等结果推断，PAPS-1和PAPS-2均为Ⅰ型鼠李半乳糖醛酸聚糖(RG-Ⅰ)果胶，富含阿拉伯半乳聚糖(AG)支链，主链被不同程度甲酯化和乙酰化，其中，PAPS-2的糖醛酸含量高于PAPS-1。两个多糖组分均显著诱导RAW264.7细胞的活化，TNFα、IL6、IL10、GCSF、iNOS、COX-2等基因的表达以及TNFα、IL6、IL10等细胞因子的释放。
　　本研究结果可以为我国樱桃的科学消费和综合开发利用提供理论依据。

目录

声明

致谢

摘要

缩略语表

1 绪论

1．1 樱桃的分类地位及其目前的栽培分布情况

1．1．1 樱桃的分类地位和全球的栽培分布

1．1．2 我国樱桃栽培分布

1．2 樱桃的理化性质研究进展

1．2．1 外观和风味品质

1．2．2 果肉酚类物质

1．2．3 类胡萝卜素

1．2．4 其他活性成分

1．3 樱桃生物活性研究进展

1．3．1 抗氧化活性

1．3．2 抗肿瘤活性

1．3．3 降血糖活性

1．3．4 抗炎以及相关活性

1．3．5 其他活性

1．4 研究目的意义与内容

2 樱桃果实理化特性分析

2．1 材料与方法

2．1．1 果实材料

2．1．2 试剂

2．1．3 品质指标测定

2．1．4 总酚和总花色苷含量测定

2．1．5 抗氧化活性测定

2．1．6 酚类组分的制备与HPLC-ESI-MS／MS检测

2．1．7 酚类组分的HPLC定量分析

2．1．8 缩合单宁测定

2．1．9 统计学分析

2．2 结果

2．2．1 果实品质指标

2．2．2 总酚含量和总抗氧化活性

2．2．3 酚类物质组分的鉴定和含量测定

2．3 讨论

2．3．1 果实品质分析

2．3．2 酚类物质组成

3 樱桃提取物的系统分离及其抗氧化和免疫调节活性分析

3．1 材料和方法

3．1．1 果实材料

3．1．2 试剂

3．1．3 樱桃果肉提取物的系统分离

3．1．4 总糖、总酚、蛋白含量测定

3．1．5 抗氧化活性测定

3．1．6 免疫调节活性测定

3．1．7 统计学分析

3．2 结果

3．2．1 樱桃果肉提取物的系统分离

3．2．2 不同提取组分的抗氧化活性

3．2．3 不同提取组分的免疫调节活性

3．3 讨论

3．3．1 不同提取组分的抗氧化活性

3．3．2 不同提取组分的免疫调节活性

4 甜樱桃酚类物质的分离与抗氧化、免疫调节活性分析

4．1 材料与方法

4．1．1 材料

4．1．2 试剂

4．1．3 酚类提取物的分离

4．1．4 酚类组分含量测定

4．1．5 抗氧化活性测定

4．1．6 免疫调节活性测定

4．1．7 统计学分析

4．2 结果

4．2．1 酚类物质的分离

4．2．2 不同酚类组分的抗氧化能力

4．2．3 不同酚类组分的免疫调节活性

4．3 讨论

4．3．1 酚类物质的分离

4．3．2 不同酚类组分的抗氧化活性

4．3．3 不同酚类组分的免疫调节活性

5 甜樱桃多糖的纯化、结构与免疫调节活性分析

5．1 材料与方法

5．1．1 材料

5．1．2 试剂

5．1．3 离子交换层析分级

5．1．4 分子筛层析分级

5．1．5 总糖、总酚、蛋白含量测定

5．1．6 紫外-可见光谱扫描

5．1．7 红外光谱(IR)分析

5．1．8 分子量测定

5．1．9 单糖组成分析

5．1．10 甲酯化和乙酰化程度分析

5．1．11 高碘酸氧化-Smith降解

5．1．12 核磁共振分析(NMR)

5．1．13 不同多糖组分对RAW264．7细胞NO的诱导作用

5．1．14 不同多糖组分对RAW264．7细胞基因表达的作用

5．1．15 不同多糖组分对RAW264．7细胞因子释放的作用

5．1．16 统计学分析

5．2 结果

5．2．1 水溶性多糖的层析分级

5．2．2 PAPS-1和PAPS-2的结构特征比较分析

5．2．3 PAPS-1和PAPS-2的免疫调节活性分析

5．3 讨论

5．3．1 PAPS-1和PAPS-2的结构特征

5．3．2 PAPS-1和PAPS-2的免疫调节活性

6 总结与展望

6．1 总结

6．2 展望

参考文献

作者简历及在学期间所取得的科研成果