黄芪甲苷联合川穹嗪对糖尿病大鼠的肾脏保护作用及其基于AKt/mTOR的机制研究

摘要

目的:
　　研究黄芪甲苷联合川穹嗪对STZ加高脂饲料诱导的糖尿病大鼠肾脏的保护作用，同时探讨其对Akt/mTOR信号通路的影响，为两药联合用于防治糖尿病及其肾脏并发症提供实验依据。
　　方法:
　　1.实验动物:
　　SPF级雄性SD大鼠68只，适应性饲养1周后按体重随机分成正常组8只，糖尿病模型组60只。模型组大鼠尾静脉注射30mg·kg-1STZ，注射当天开始喂于高糖高脂饲料;正常组大鼠尾静脉注射等体积的枸橼酸缓冲液，并给予普通标准饲料喂养。4周后，禁食12h，模型组大鼠尾静脉采血测定血糖，筛选空腹血糖≥16.7mmol·L-1，并具有明显多饮、多食、多尿症状的40只大鼠作为Ⅱ型糖尿病模型大鼠。
　　2.药物干预:
　　将40只成模大鼠按血糖和体重随机分成5组，即糖尿病模型组、黄芪甲苷组、川芎嗪组、黄芪甲苷联合川芎嗪组、缬沙坦阳性组，每组8只。黄芪甲苷组、川芎嗪组、黄芪甲苷联合川芎嗪组、缬沙坦阳性组的剂量分别为:20mg·kg-1、150mg·kg-1、20mg·kg-1+150mg·kg-1和25mg·kg-1，模型组和正常组大鼠按体重灌胃给予生理盐水，给药容积为10ml·kg-1，每日一次，连续给药6周。
　　3.指标检测:
　　实验大鼠经药物干预后，观察大鼠一般体征情况;定期尾静脉取血测定空腹血糖、糖化血红蛋白。定期测定大鼠体重、摄食量和饮水量，并用代谢笼收集24h尿液，测定尿量及24h尿蛋白。实验结束时心脏取血测定总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、微量白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)等血液生化指标;剥离大鼠肾脏计算肾脏指数;HE染色观察大鼠肾脏病理变化;Western blot检测肾脏AKT/mTOR蛋白表达水平。
　　结果:
　　1.糖尿病模型大鼠的糖化血红蛋白、血糖水平比正常对照组显著升高，体重明显下降，饮食、饮水、尿量、CHOL、TG、LDL-C等明显增加，符合Ⅱ型糖尿病症状。血清提取液测得肾损伤的相关指标BUN、Scr水平显著增加，尿生化显示24小时尿蛋白显著增加，肾脏指数升高，HE染色结果显示大鼠肾脏肾小球体积增大，系膜基质增多，肾小管上皮空泡样变，符合糖尿病大鼠肾脏早期损伤诊断。黄芪甲苷(20mg·kg-1)组能提高大鼠HDL-C，降低Scr、ALB，但无法有效控制血糖和降低BUN、24小时尿蛋白等;川芎嗪(150mg·kg-1)组能显著降低大鼠FPG，但不能有效控制LDL-C等血脂相关指标和BUN、Scr、24小时尿蛋白等肾脏相关指标;黄芪甲苷联合川芎嗪(20mg·kg-1+150mg·kg-1)组能有效降低糖尿病大鼠HbA1c和FPG水平，降低摄食量和饮水量，增加体重，降低TG、LDL-C、Scr、BUN、ALB、TP等血生化指标，降低24小时尿蛋白，减轻肾脏指数和改善肾脏病理改变。结果显示联合用药的降血糖和肾脏保护作用较单独用药明显增强。此外，黄芪甲苷和川芎嗪联合用药在控制血糖方面与阳性药缬沙坦(25mg·kg-1)的作用相当，且在改善BUN、Scr等肾损伤指标方面显示了一定的优势。
　　2.Western blot结果显示，各组大鼠肾组织Akt总蛋白无显著性差异模型组大鼠肾组织磷酸化Akt蛋白表达显著高于正常组，所有给药组大鼠的肾组织磷酸化Akt蛋白表达水平较模型组均有一定程度降低，其中Lig组和Ast IV+Lig组显著性降低。此外，各实验组大鼠肾组织mTOR总蛋白表达无显著性差异，联合用药组组大鼠肾组织磷酸化mTOR蛋白较模型组显著降低，黄芪甲苷联合川芎嗪组可能通过抑制Akt/mTOR信号通路发挥保护糖尿病肾脏作用。
　　结论:
　　1.黄芪甲苷联合川穹嗪可改善STZ加高脂饲料诱导糖尿病大鼠的一般体征状况，有效降低糖化血红蛋白和空腹血糖水平，改善TG、LDL-C等脂代谢相关指标，且优于黄芪甲苷、川芎嗪单独用药。
　　2.黄芪甲苷联合川穹嗪可改善Scr、BUN等肾损伤指标，降低24小时尿蛋白，改善肾功能，减轻肾脏指数和改善肾脏病理改变，其肾脏保护作用优于黄芪甲苷、川芎嗪单独用药。
　　3.黄芪甲苷联合川穹嗪可抑制糖尿病大鼠活化的肾脏Akt/mTOR信号通路，这可能是其改善糖尿病肾脏病变的机制。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词表

1、前言

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验动物

2．1．3 实验试剂

2．1．4 配制方法

2．1．5 实验仪器

2．2 实验方法

2．2．1 Ⅱ型糖尿病大鼠模型的制备

2．2．2 糖尿病大鼠分组与给药

2．2．3 大鼠一般体征情况观察

2．2．4 糖尿病大鼠血糖的测定

2．2．6 糖尿病大鼠24h尿蛋白测定

2．2．7 糖尿病大鼠血液生化指标测定

2．2．8 糖尿病大鼠肾脏指数测定

2．2．9 糖尿病大鼠肾脏HE染色观察

2．2．1 0 糖尿病大鼠肾脏AKT／mTOR蛋白表达

2．2．1 1．数据统计

3．实验结果

3．1 各组大鼠一般体征状况观察

3．2 药物作用后各组大鼠空腹血糖变化

3．3 药物作用后各组大鼠糖化血红蛋白变化

3．4 药物作用后各组大鼠体重变化

3．5 药物作用后各组大鼠摄食、饮水和尿量变化

3．6 药物作用后各组肾脏指数变化

3．7 药物作用后各组大鼠血液生化指标变化

3．8 药物作用后各组大鼠24小时尿蛋白变化

3．9 药物作用后各组大鼠肾组织病理变化情况

3．1 0 药物作用后各组大鼠肾组织AKT／mTOR变化情况

4．讨论

5．结论

参考文献

综述

作者简历及在读期间所取得的科研成果