抑制Nosema ceranae增殖的物质筛选和穿心莲水煎剂防治蜜蜂病毒病的研究

摘要

蜜蜂是一类重要的经济昆虫，通过生产蜂产品和为农作物授粉带来巨大经济效益。蜜蜂孢子虫病(Nosemosis)是由微孢子虫寄生成年蜂中肠等组织引起的慢性传染性疾病，病原体包括蜜蜂微孢子虫（Nosema apis）和东方蜜蜂微孢子虫（Nosema cerenae）。由N.ceranae引起的西方蜜蜂的孢子虫病是影响当前世界养蜂业的主要病害之一。N.ceranae孢子能够通过蜜蜂排泄物、受污染的蜂机具以及蜜蜂交哺行为等途径在蜂群中传播，造成蜂群生产力降低，给养蜂业带来巨大经济损失。烟曲霉素是一种能够有效防治蜜蜂孢子虫病的抗生素药物，然而会对蜂产品造成污染，因此，亟需寻找其他防治孢子虫病的安全药物。本课题结合国内外利用植物制剂防治蜜蜂孢子虫病的经验，筛选有效抑制孢子增殖的植物提取物及单体，并进行穿心莲水煎剂防治蜜蜂病毒病的初步研究。主要研究内容和结果包括:
　　1.对刚出房的西方蜜蜂(Apis mellifera)分别进行N.ceranae的接种后，将穿心莲水煎剂、黄柏水煎剂和葡萄皮醇提物3种中药提取物按不同组合溶于50％糖浆溶液中，饲喂给蜜蜂，记录死亡数并于第13d进行孢子计数。结果表明，7％穿心莲水煎剂、2％黄柏水煎剂及0.5％葡萄皮醇提物3种中药提取物相互组合或单独使用均能有效抑制孢子的增殖(p＜0.05);穿心莲水煎剂与黄柏水煎剂的组合使受N.ceranae感染的蜜蜂寿命缩短(p＜0.01)。综合孢子数和存活率结果可知，7％穿心莲水煎剂、7％穿心莲水煎剂与0.5％葡萄皮醇提物原浓度或原浓度的二分之一组合、2％黄柏水煎剂与0.5％葡萄皮醇提物原浓度或原浓度的二分之一组合更适合用于防治蜜蜂孢子虫病。
　　2.对3种植物单体和2种有机酸防治蜜蜂孢子虫病的效果进行研究。结果表明，7％穿心莲水煎剂、0.1484mg/mL脱水穿心莲内酯、3种浓度的两种穿心莲单体组合[(0.0105+0.0371)mg/mL、(0.021+0.0742)mg/mL、(0.042+0.1484)mg/mL]、2.8125mg/mL草酸、1mg/mL柠檬酸、0.01mg/mL和0.02mg/mL白藜芦醇均能有效抑制N.ceranae孢子的增殖，(p＜0.01)，其中7％穿心莲水煎剂，(0.042+0.1484)mg/mL的两种穿心莲单体组合、2.8125mg/mL草酸和1mg/mL柠檬酸效果更好;但2.8125mg/mL的草酸表现出较高毒性，实验蜜蜂在13d内全部死亡。最终得出，(0.042+0.1484)mg/mL的两种穿心莲单体组合、1mg/mL柠檬酸更适合用于防治蜜蜂孢子虫病。
　　3.给蜜蜂接种病毒液（含DWV、IAPV两种病毒），将7％穿心莲水煎剂以不同方式饲喂给蜜蜂，记录死亡数并于接种病毒液后的第3d和第8d对DWV、IAPV两种病毒进行病毒拷贝数的定量。结果表明，对于已感染大量病毒的新出房蜜蜂，穿心莲水煎剂并无治疗效果，相反，饲喂穿心莲水煎剂还会加速蜜蜂死亡;提前饲喂穿心莲水煎剂对出房48h后接种病毒的蜜蜂可能有一定的预防作用。这一预防作用可表现于减缓病毒拷贝数的上升。
　　本研究为养蜂生产上蜜蜂孢子虫病的防治提供了一些可选方法，而且结果表明，利用穿心莲防治蜜蜂孢子虫病可同时起到对病毒病的一定预防作用。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 引言

1 蜜蜂的基本情况

2 蜜蜂孢子虫病的研究进展

2．1 微孢子虫的概述

2．2 感染蜜蜂的微孢子虫研究进展

3 蜜蜂病毒病

4 穿心莲抗病毒作用研究

5 本研究的目的、意义和主要内容、技术路线

5．1 研究目的

5．2 研究意义

5．3 主要内容

5．4 技术路线

第二章 植物提取物组合抑制N.ceranae孢子增殖的效果研究

1 实验材料与方法

1．1 主要实验材料与仪器

1．2 植物提取物的制备

1．3 蜂群的选择

1．4 蜂场蜜蜂体内微孢子虫的种类鉴定

1．5 孢子的提纯

1．6 含孢子的糖浆溶液配制

1．7 3种植物提取物的组合实验

2 实验结果

2．1 植物提取物组合对N.ceranae孢子增殖的抑制效果

2．2 植物提取物组合对感染N.ceranae的A.mellifera寿命的影响

3 小结与讨论

第三章 植物单体与有机酸抑制N.ceranae孢子增殖的效果研究

1 实验材料与方法

1．1 实验材料与仪器

1．2 实验方法

2 实验结果

2．1 植物单体与有机酸对N.ceranae孢子增殖的抑制效果

2．2 植物单体与有机酸对感染N.ceranae的蜜蜂寿命的影响

3 小结与讨论

第四章 穿心莲水煎剂防治蜜蜂病毒病的初步研究

1 实验材料与方法

1．1 实验材料与仪器

1．2 实验方法

2 实验结果

2．1 病毒拷贝数分析

2．2 死亡率分析

3 小结与讨论

3．1 穿心莲水煎剂对蜜蜂病毒病的治疗作用

3．2 穿心莲水煎剂对蜜蜂病毒病的预防作用

3．3 全程饲喂穿心莲水煎剂的影响

3．4 其他

第五章 全文总结、创新点和研究展望

1 主要结论

2 创新点

3 不足之处与研究展望

参考文献

硕士期间发表的论文

国际学术会议交流

致谢