缺血预处理对肝缺血再灌注时细胞凋亡及调控基因表达的影响

摘要

目的：在各种肝脏外科手术中，为减少术中出血，常用暂时性的肝门阻断的方法，而其可能引起严重的肝脏再灌注损伤，使肝脏功能受到明显损害。细胞凋亡是细胞死亡方式之一。国内外研究已证实缺血再灌注（ischemia reperfusionIR）可以引起肝细胞凋亡,而缺血预处理(ischemic preconditioning IP)是预防缺血再灌注损伤的有效手段，但其是否能通过抑制凋亡的方式而起到细胞保护作用，该方面尚待研究。本研究主要通过对兔肝缺血再灌注过程中肝细胞凋亡情况，缺血预处理后肝细胞凋亡以及其调控基因bcl-2/bax 蛋白表达情况进行对比分析，期望从细胞及分子生物水平探讨缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护机制。方法：将家兔分为假手术（SO）组、缺血再灌注（IR）组，缺血预处理（IP）组。后2 组中分为4 个亚组（IR3h，12h，24h, 48h，IP3h，12h，24h,48h）。缺血期均为60min。缺血预处理为缺血前采用5min 缺血及5min 再灌注的方法。分别于再灌注3h,12h,24h,48h 后处死动物采取肝脏标本，SO 组于手术后24h 采取肝标本。检测细胞凋亡及bcl-2/bax 蛋白表达水平。结果：IR 组和IP 组与SO 组比较，细胞凋亡指数（AI）差异有显著性增加（P<0.01）；IP 组中IP3h，12h，24h较同时间段IR 组细胞凋亡指数差异有显著性降低（P<0.05）；IP48h 与IR48h 相比，凋亡指数无显著性差异（P>0.05）。Bcl-2 蛋白表达：IP 组与IR 组及SO 组比较，差异有显著性增加（P<0.05）；IR 组与SO 组比较，差异无显著性（P>0.05）。Bax 蛋白表达：IR 组和IP 组与SO 组比较，差异有显著性增高（P<0.05）；IP 组与IR 组比较，差异无显著性（P>0.05）。结论：1) 肝缺血再灌注不仅造成肝细胞坏死，还可引起肝细胞凋亡; 2) 在发生缺血再灌注过程中，作为一种主动性的细胞死亡方式，细胞凋亡现象主要在再灌注早中期大量存在;3）缺血预处理可能通过激活bcl-2 蛋白的表达从而抑制肝细胞凋亡。