人参皂甙Rb1对大鼠局灶性脑缺血脑组织GDNF mRNA与蛋白表达的影响

摘要

目的：已有的研究表明人参皂甙Rb1对缺血性脑损伤具有神经保护作用，但这种神经保护作用机制尚不清楚，故本实验探讨人参皂甙Rb1神经保护作用是否通过增加胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的表达而促进神经组织的修复。 方法:Wistar健康成年大鼠250-300克；雌雄不限，大鼠脑缺血模型成功后随机分为两组：人参皂甙Rb1给药组[再灌注后立即腹腔注射人参皂甙Rb1(40mg/kg)]与单纯脑缺血再灌注组。正常组大鼠、假手术组各5只作为对照组。线栓法阻断大鼠大脑中动脉(middlecerebralartery,MCA)2小时后，分别再灌注3小时，12小时，1天，2天，3天，5天制备成各时间组，每组5只。在各时间点过量麻醉处死动物，经心灌注固定，取出脑组织制成石蜡切片或在各时间点过量麻醉，断头取脑组织放入-80℃保存，备用。逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)测定GDNFmRNA水平的变化，免疫组织化.学(immunohistochemistry,IHC)染色观察GDNF蛋白表达的改变及分布的特点。 结果：正常组与假手术组皮质区广泛的GDNF(+)细胞，在其它脑区有较多的GDNF(+)～(++)细胞。单纯脑缺血再灌注组：再灌注三小时，额顶皮质缺血周边区广泛GDNF(++)的细胞，纹状体缺血周边区有一些GDNF(++)细胞，同侧下丘脑可见到少量GDNF弱阳性细胞。再灌注12小时，额项皮质缺血周边区有一些GDNF(++)细胞，纹状体缺血周边区零星散在的GDNF(+)细胞。同侧下丘脑未见到GDNF阳性细胞。再灌注1天，GDNF(+)细胞仅存在于额项皮质缺血周边区，纹状体、下丘脑缺血周边区均未见到GDNF阳性细胞。再灌注2天，额顶皮质缺血周边区内弥漫分布着大量的GDNF(++)的细胞。纹状体、下丘脑缺血周边区可见少许GDNF(+)的细胞。再灌注3天，额顶皮质缺血周边区GDNF阳性细胞数量明显减少；纹状体缺血周边区有少量GDNF(+)的细胞。再灌注5天，缺血侧纹状体与下丘脑无GDNF阳性细胞，额顶皮质缺血周边区有散在少量GDNF弱阳性的细胞。整个再灌注过程中，GDNF阳性细胞数在3小时升高，12h与1d降低，2天又升高，随后下降。各时间点GDNF阳性细胞数同2天组比较，差异具有显著性(P＜0.01)。在人参皂甙Rb1给药组，与单纯脑缺血再灌注组同时间点比较，再灌注3小时额顶皮质缺血周边区GDNF的阳性细胞数增多，染色增强。下丘脑偶见数个GDNF弱阳性的细胞。再灌注12小时额项皮质、纹状体缺血周边区GDNF的阳性细胞数继续增多，染色增强，且同侧下丘脑有较多的GDNF弱阳性的细胞。再灌注1天，GDNF强阳性细胞数增多，主要位于视前区、纹状体缺血周边区。再灌注2天，额项皮质缺血周边区GDNF强阳性细胞数明显增多、染色增强。纹状体、海马、视前区、皮质杏仁核也有较多的GDNF中等阳性的细胞。再灌注3天，GDNF阳性细胞数增多，主要位于额项皮质缺血周边区，但染色无变化。再灌注5天，GDNF阳性细胞数主要集中于双侧皮质，染色呈强阳性。统计学分析显示，人参皂甙Rb1给药组，GDNF阳性细胞数在各时间点显著高于单纯脑缺血再灌注组(P＜0.01)。RT-PCR的实验显示，从凝胶上cDNA的亮度判断，在单纯脑缺血再灌注组，在3小时与2天组GDNFmRNA的.表达强于其它各时间点；在人参皂甙Rb1给药组，48小时GDNFmRNA的表达强于其它各时间点。在人参皂甙Rb1给药组和单纯脑缺血再灌注组相比，从cDNA的亮度上看无明显差异。 结论：1.脑缺血再灌注损伤后GDNFmRNA与蛋白表达在3小时与2天分别有两个高峰。给予人参皂甙Rb1后，GDNFmRNA与蛋白表达在2天达高峰。 2.单纯脑缺血再灌注组和人参皂甙Rb1给药组，GDNF阳性细胞数主要分布于额顶皮质缺血周边区，其次为纹状体缺血周边区，缺血侧下丘脑偶见到数个GDNF阳性细胞。 3.根据两组间GDNF免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色强弱比较，给予人参皂甙Rb1后，在同一时间点，同一缺血周边区GDNF阳性细胞数染色增强。对GDNF阳性细胞数统计分析显示，人参皂甙Rb1给药组各时间点GDNF阳性细胞数远远高于单纯脑缺血再灌注组同时间点的GDNF阳性细胞数(P＜0.01)，提示人参皂甙Rb1能诱导GDNF蛋白表达。 4.RT-PCR的实验显示，给予人参皂甙Rb1后，GDNFmRNA表达未增强，而免疫组化的实验显示，给予人参皂甙Rb1后，GDNF蛋白表达明显增强，提示Rb1对大鼠脑缺血的神经保护作用与增加GDNF蛋白质翻译密切相关。至于是否同增加GDNF基因转录水平有关，需要做进一步的研究。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

中英文对照

致谢

胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）与脑缺血 综述

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