胃癌血清蛋白指纹图谱诊断模型的研究

摘要

目的：现代研究表明，胃癌与100多种基因及其蛋白产物密切相关，特别是在胃癌发生、发展的不同阶段伴随着不同的基因改变，并进而产生不同的蛋白质产物。单个基因、蛋白质检测所需的技术条件高、仪器昂贵、步骤繁琐、耗时冗长，而且对于胃癌诊断不是敏感性不好就是特异性不高，不适用于大规模的筛查、临床检测和推广应用。蛋白质组学研究从整体出发，通过分离和鉴定肿瘤发展过程中出现的差异蛋白质，来揭示肿瘤的发生、发展、转化的规律，从而寻找不同肿瘤的血清蛋白表达类型。本研究旨在利用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱分析(surface-enhanced laser desorption-ionizatiOn time-of-flight massspectrometry，SELDI ToF-MS)探讨、筛选胃癌发生发展过程中特异的血清蛋白变化，并进而建立胃癌的血清蛋白指纹图谱诊断模型，为胃癌的普查、预警、诊治等提供新的诊疗方法，以提高胃癌的治疗效果。 方法：选2006年9月至2007年4月期间我科住院经手术后病理证实的胃癌病人40例、住院和门诊经手术或胃镜证实的胃溃疡病人20例、正常人20例，分别抽血5ml，制备标本，加入芯片，通过亲合作用使蛋白质结合到芯片的生物学位点上；选择性清洗去掉非特异性结合的蛋白质和缓冲液中的杂质，以消除干扰；室温干燥后，加能量吸收分子(Energy Absorb M0lecule，EAM)到每个点上，使其与蛋白质结成混合晶体，以促进蛋白质在飞行时间质谱检测中的解吸附和离子化；用激光解析电离的方法将保留在芯片上的蛋白质解离出来，不同的质量电荷比(m/z)飞行时间不同，用芯片阅读器读取数据，并通过分析软件对数据进行分析。选特异性和敏感性好的差异蛋白质峰组成蛋白指纹图谱，建立胃癌诊断模型。 结果：在40例胃癌患者中，查见4个或以上差异蛋白质峰的1例，3个差异蛋白质峰的9例，2个差异蛋白质峰的16例，1个差异蛋白质峰的11例，m/z分别为：5329Da、4095Da、5910Da、8691Da、3300Da，未发现有差异蛋白质峰的3例；20例胃良性病变患者中，仅2例发现3个差异蛋白质峰值，m/z分别为3933Da、5910Da和4095Da；20例正常人中均未发现差异蛋白质峰。经检验具有统计学差异(p<0.05)。筛选m/z为4095Da、5910Da、8691Da的差异蛋白组成的蛋白指纹图谱对胃癌的诊断灵敏度92.5％，特异度97.5％，阳性预测值为97.3％，阴性预测值为92.9％。 结论： 1．SELDI-TOF-MS应用于胃癌差异蛋白的筛选是可行的，具有可直接用粗生物样品、检测简单迅速、敏感性和特异性高、高通量等优点，不论是在探索性研究还是临床检测上，都有很好的应用前景； 2．筛选出的胃癌差异蛋白质，对胃癌具有明确的诊断意义； 3．胃癌的血清蛋白指纹图谱诊断模型对胃癌的诊断敏感性好、特异性高，可用于胃癌的临床诊断或普查。

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参考文献

致谢

与胃癌诊断有关的蛋白类标志物及其研究进展(综述)