应用SELDI-TOF-MS筛选急性淋巴细胞白血病患儿血清生物标志物的研究

摘要

目的： 因早期症状不明显，小儿急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia (ALL) )诊断时间均较晚，经正规化疗，儿童ALL的治愈率接近80％，但仍有约20％的ALL患儿复发，其主要原因是缓解时体内仍残留一定数量的白血病细胞，又称微量残留病(minimal residual disease (MRD))。我们用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱 (surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry SELDI-TOF-MS)) 技术结合蛋白芯片检测ALL患儿治疗前、治疗完全缓解（complete remission (CR) ）及正常儿童血清蛋白质谱的差异性表达，以发现ALL的早期诊断的生物标志物以及监测微量残留病的新方法。 方法： 应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS) 仪检测结合在蛋白质芯片上的血清蛋白质，获得27例急性淋巴细胞白血病(ALL)，10例为ALL完全缓解（CR），21例正常对照者血清蛋白表达指纹图谱，并用Biomarker Wizard和Biomarker Paterns System 5.0软件对数据进行分析，建立诊断模型。 结果： 在质荷比为1000～20000范围内，共检测到三组间有差异的蛋白质峰62个，其中ALL组与正常对照组比较有显著差异（Ｐ<0.01）的蛋白质峰有30个，高表达的蛋白质峰22个，低表达的蛋白质峰8个;ALL组与CR组间有显著差异（Ｐ<0.01）的蛋白质峰有11个，高表达的蛋白质峰有9个，低表达的蛋白质峰2个;ALL-CR组与正常对照组间有显著差异（Ｐ<0.01）的蛋白质峰有5个，高表达的蛋白质峰4个，低表达的蛋白质峰1个; 用Biomarker wizard 软件对三组血清样本的蛋白质指纹图谱进行比较，发现有最有意义的蛋白质中，质荷比为2770.43的蛋白质最有意义。分析21例正常对照和27例ALL患儿血清的蛋白质组成，用质荷比为2770.43一个蛋白质组成生物标志物，这个生物标志物的分析数据共产生2个终结点，结果发现该两个终结点可将正常儿童与ALL患儿准确分组，错误分组率为0％。 结论： 1、ALL患儿与正常儿童血清蛋白质组学水平有显著差异； 2、质荷比（m/z）值为2770.43的蛋白质在ALL患儿血清蛋白质谱中波峰强度明显升高,可能是ALL的生物标志物； 3、SELDI-TOF-MS技术可能为急性淋巴细胞白血病完全缓解后的微小残留病监测提供新的方法； 4 、SELDI-TOF-MS技术是寻找疾病相关性蛋白质的有效工具。