应用SELDI-TOF-MS筛选激素耐药型肾病综合征患儿尿液生物标志物的研究

摘要

目的:原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome，INS)为儿童常见的肾脏疾病，糖皮质激素(glucocorticoid，GC)为目前公认治疗INS的主要药物，INS的转归很大程度上取决于患儿对GC治疗敏感抑或耐药情况，激素敏感型肾病综合征(steroid-sensitive NS，SSNS)在接受激素治疗后，病情能得到及时有效的控制，而激素耐药型肾病综合征(steroid-resistant NS,SRNS)对GC的治疗却表现为无效应或部份效应，其病情容易迁延反复，最终发展为终末期肾病的几率明显增加。迄今，没有明确的实验室参数能早期鉴别SRNS。我们用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry SEIDI-TOF-MS)技术结合蛋白质芯片检测SRNS，SSNS患儿激素治疗前尿液蛋白质谱的差异性表达，以发现SRNS患儿早期诊断的标志物，尽快启动更为合适的治疗方案，及时和有效的控制病情，避免足量激素的无效使用和伴随的药物毒副作用，改善SRNS患儿的预后。方法:运用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)技术分析检测结合在蛋白质芯片上的尿液蛋白质，获得41例INS激素治疗前尿液蛋白表达指纹图谱，32例为SSNS，9例为SRNS，30例正常儿童尿液蛋白表达指纹图谱，并用Biomarker Wizard和Biomarker Patems System 5.0软件对数据进行分析，建立诊断模型。结果:在分子质量/电荷比值(质荷比，mass electron ratio，M/Z)为2000～20000范围内，SRNS组与SSNS组间有显著统计学意义(p<0.01)的蛋白质峰有8个，5个蛋白质峰在SRNS组高表达，M/Z分别是3067，5108，8122，11820，14356，3个蛋白质峰在SSNS组高表达，M/Z分别是4011，4500，6703； SRNS组与正常对照组间有显著差异的蛋白质峰有13个，有12个蛋白质峰在SRNS组高表达，M/Z分别是2100，2423，2636，3067，3399，4900，5108，6703，7012，8122，11820，14356，1个蛋白质峰在正常对照组高表达，M/Z是5020；SSNS组和正常对照组间有显著差异的蛋白质峰有11个，有10个蛋白质峰在SSNS组高表达，M/Z分别是2100，2423，2636，3399，4011，4500，4900，6703，7012，7721，有1个蛋白质峰在正常对照组高表达，M/Z是5020。用Biomarker wizard软件对SRNS组和SSNS组尿液样本的蛋白质指纹图进行比较，发现2个蛋白质峰(11820，14356 M/Z)组合的诊断模型，可将SRNS与SSNS患儿准确分组，灵敏度为82.98％，特异度为90.48％。在蛋白质库中搜索与上述M/Z值相对应的蛋白质，M/Z分别是2100，2636，3067，4500，5020的蛋白质在蛋白质库中未发现，可能为新蛋白质。结论:1.激素耐药型肾病综合征患儿与激素敏感型肾病综合征患儿相比，有8个蛋白质峰显著差异，它们M/Z分别是3067，4011，4500，5108，6703，8122，11820，14356，可能是SRNS患儿的尿液生物标志物，其中3067，4500可能是新的蛋白质。2.M/Z为11820,14356的蛋白质组合的诊断模型诊断SRNS的灵敏度88.89％，特异度93.75％，诊断指数(DI)163.46％，Youden指数73.46％，阳性预测值95.12％，阴性预测值70.37％，可将SRNS与SSNS患儿准确分组。3.在激素耐药型肾病综合征患儿尿液中显著高表达的蛋白质可能为激素耐药型肾病综合征新药开发提供耙标。4.既在激素耐药型肾病综合征患儿尿液中表达，又在激素敏感型肾病综合征患儿尿液中表达，而与正常对照比较有显著差异的蛋白质峰可能为肾病综合征的标志物，它们M/Z分别是2100，2423，2636，3399，4900，5020，7021，其中2100，2636，5020可能为新的蛋白质。5.SELDI-TOF技术是寻找疾病相关性蛋白质的有效工具。

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综述 基因芯片技术在儿童白血病研究中的应用