GSK-3β抑制剂对大鼠脊髓损伤后轴突再生与功能恢复影响的实验研究

摘要

目的:观察 GSK-3β抑制剂对大鼠脊髓损伤后轴突再生与功能恢复的影响。方法:①取健康雌性SD成年大鼠115只,体重250±30g,分为四组。A组:TDZD-8治疗组(35只),B组:PBS治疗组(35只)C组:手术瘫痪对照组(35只),D组:空白手术对照组(10只)。WD法制成SD大鼠T9平面完全性截瘫的脊髓损伤动物模型,脊髓损伤后1h内经蛛网膜下腔注射。TDZD-8(1mg/kg/Qd)和 PBS(60μl),连续注射3w。②各组在损伤后8h、24h、7d(每个时相2只大鼠)用4％多聚甲醛灌注取材后作冰冻切片,行TUNEL法检测细胞凋亡情况。③各组在损伤后24h、7d、14d(每个时相2只大鼠)用4％多聚甲醛灌注取材后作冰冻切片,行SP法作免疫组化染色检测GAP-43的表达情况。④各组在损伤后3w,6w、8w(每个时相5只大鼠)作BBB评分,评估双下肢运动功能恢复情况。⑤各组随机抽取3只模型,在损伤后第6w经大脑感觉运动皮质区注射FITC荧光示踪剂,注入示踪剂2w后4％多聚甲醛灌注取材后作冰冻切片,观察FITC荧光示踪剂的传导情况。⑥各组随机抽取5只模型在损伤后3w、8w检测体感诱发电位(SEP)振幅与潜伏期的变化情况。结果:①凋亡细胞的表达:脊髓损伤后8h开始出现凋亡细胞。TDZD-8治疗组阳性细胞数量均明显低于PBS治疗组和手术瘫痪对照组(P<0.05),但高于空白手术对照组。术后8h各组阳性细胞数量依次为:50.27±4.74、58.93±2.46、58.47±2.09、8.27±1.44。术后24h各组阳性细胞数量依次为:45.73±4.95、55.40±3.94、54.53±3.11、8.27±1.44。术后7d各组阳性细胞数量依次为:10.67±1.50、15.67±1.49、15.60±1.68、8.27±1.44。②GAP-43的表达:脊髓损伤后 GAP-43的表达逐渐增加,第14d达到高峰,各时间点中TDZD-8治疗组GAP-43表达面积均明显高于其余三组(P<0.05)。术后1d各组 GAP-43阳性表达的面积依次为:79.2±5.31、43.3±3.99、42.3±4.77、6.3±2.31,术后7d各组 GAP-43阳性表达的面积依次为:107.3±4.43、70.1±3.57、68.2±3.34、6.3±2.31,术后2w各组GAP-43阳性表达的面积依次为:156.7±4.35、94.5±3.91、96.1±3.56、6.3±2.31。③荧光示踪结果:损伤区域脊髓组织结构紊乱,TDZD-8治疗组有较多再生纤维穿过损伤部位,而PBS治疗组和手术瘫痪对照组损伤部位有少许的神经纤维再生,无法穿过损伤部位,再生神经纤维的面积计数依次为:82.0±1.7,35.2±1.7,33.74±1.3,138±2.2。④术后3w、8w检测SEP结果:TDZD-8治疗组较PBS治疗组、手术瘫痪对照组潜伏期明显缩短,振幅显著升高。⑤BBB运动功能评分:术后各组评分均有升高,术后8w PBS治疗组、TDZD-8治疗组、手术瘫痪对照组和空白手术对照组评分为:9.4±1.14、8.2±0.45、8.0±0.71、21±0.00。p<0.05结论:①.TDZD-8能够抑制神经细胞凋亡,减少脊髓继发性损伤。②.TDZD-8能够上调生长相关蛋白43,能够缩短体感诱发电位潜伏期、增加其波幅,促进残存神经元出芽或促进轴突再生,增加神经元的可塑性,促进脊髓损伤后功能恢复。

目录

文摘

英文文摘

1.3 前言

1.4 材料与方法

1.5 结果

1.6 讨论

1.7 结论

1.8 参考文献

1.9 GSK-3β与脊髓损伤修复研究进展(综述)

参考文献

2 英汉缩略词对照表

3 致谢

论著