复方苦参注射液对人肺腺癌A549细胞株增殖、侵袭能力及乙酰肝素酶表达的影响

摘要

目的:通过体外研究复方苦参注射液对人肺腺癌A549细胞株的作用,探讨复方苦参注射液对人肺腺癌A549细胞株增殖及乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)表达的影响及其可能的机制。
　　 方法:(1)培养肺腺癌A549细胞:将肺腺癌A549细胞株接种在25ml培养瓶内,以含10％小牛血清的RPMI1640培养液,在5％CO2、37℃孵箱进行培养。(2)取对数生长期培养的肺腺癌A549细胞用于实验,按复方苦参注射液作用细胞的时间分为24小时,48小时和72小时三个时间段,每个时间段再按药物浓度分为0.02mg／ml(第2组)、0.04mg／ml(第3组)、0.06mg／ml(第4组)、0.08mg／ml(第5组)、0.1mg／ml(第6组)、0.2mg／ml(第7组)、0.3mg／ml(第8组)、0.4mg／ml(第9组)、0.5mg／ml(第10组)、1.0mg／ml(第11组)、1.5mg／ml(第12组)、2.0mg／ml(第13组)、2.5mg／ml(第14组)十三组药物浓度组和对照组(第1组,不加药物组),每组6个孔。待各实验浓度的药物作用细胞于各实验时间段后,用WST-1法分别检测各实验组和对照组细胞的吸光度值,计算在各时间段各实验浓度药物对细胞的生长抑制率。(3)选择各药物作用时间(24、48、72小时)和第6、7、8、9、10、11、12、13、14浓度组为实验药物浓度,用免疫细胞化学S-P(streptavidin-peroxidase)法测定细胞内Hpa的表达,培养同样时间不加药的细胞作对照组,比较实验组与对照组细胞内Hpa的表达是否有差异。(4)选择各药物作用时间(24、48、72小时)和第6、7、8、9、10、11、12、13、14浓度组为实验药物浓度,干预后的细胞应用Matrigel体外侵袭试验检测各组细胞侵袭能力,培养同样时间不加药物的细胞作对照组,比较实验组与对照组细胞体外侵袭能力是否有差异。
　　 结果:(1)当不同实验浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞24小时后:在第2～7和11～14浓度组,分别与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表明在上述浓度的复方苦参注射液作用细胞后对细胞有明显抑制作用；在第8、9、10浓度组,分别与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),即上述浓度的复方苦参注射液作用细胞后对细胞增殖无明显作用；相邻各实验组之间比较,在第11～14浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),在第2～7组间及第8、9、10浓度组间差异无统计学意义(P>0.05)。综上,不同浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞24小时后,随着实验组浓度的升高会出现一个先抑制然后作用不明显最后又出现抑制的细胞生长过程,且在达一定浓度后随着浓度越大抑制作用越明显。(2)当不同实验浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞48小时后:在第4及6～14各浓度组分别与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表明在上述浓度的复方苦参注射液作用细胞后对细胞增殖有明显抑制作用；第5浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),在第2、3浓度组分别与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),第2、3浓度组与第5组间比较差异有统计学意义(P<0.05),表明在上述浓度的复方苦参注射液作用细胞后对细胞无明显抑制作用；在相邻各组间比较4及6～14组间差异有统计学意义(P<0.05),第2、3浓度组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；第2、3浓度组与第5组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。可见用不同浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞48小时后,当达到一定的药物浓度时对细胞才有抑制作用,且随着浓度越大抑制越明显。(3)当不同实验浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞72小时后:在第7～14各浓度组分别与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),表明在上述浓度的复方苦参注射液作用细胞后对细胞有明显抑制作用；在第2～6各浓度组分别与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),表明在上述浓度的复方苦参注射液作用细胞后对细胞无明显抑制作用；相邻各实验组间比较,在第11～14组间差异有统计学意义(P<0.05),在第7～10组间差异无统计学意义(P>0.05),可见用不同浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞72小时后,当达到一定浓度时对细胞才有抑制作用,且随着药物浓度的升高抑制作用越明显。(4)选择不同实验浓度(第6～14组)的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞24小时后,在第10、11、12浓度组可见A549细胞核内Hpa表达与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；在第6～9浓度组及第13、14组,细胞核内Hpa表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；相邻各实验组间仅10～12组与6、7、8、9、13、14组比较,差异有统计学意义(P<0.05),以上10～12组间及6、7、8、9、13、14组间差异无统计学意义(P>0.05)；表明一定浓度的复方苦参注射液对A549细胞核内Hpa表达有抑制作用。(5)选择不同实验浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞48小时后,在第6～10实验组均可见A549细胞核内Hpa的表达下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；相邻各实验组间比较,第6、7组与8～10浓度组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而8～10三组之间及6、7组间,差异无统计学意义(P>0.05)；表明一定浓度的复方苦参注射液对A549细胞核内Hpa表达有抑制作用。(6)不同浓度的复方苦参注射液作用于肺腺癌A549细胞72小时后,在第6、7浓度组可见A549细胞核内Hpa的表达下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；第8～10浓度组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),相邻实验组第6、7组间比较差异无统计学意义(P>0.05),在第6、7浓度组分别与8～10浓度组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；表明复方苦参注射液作用于肺腺癌A549细胞72小时后,仅在低浓度对细胞的Hpa表达有抑制作用。(7)选择不同浓度的复方苦参注射液作用于肺腺癌A549细胞24小时后,在第10～12药物浓度组穿膜细胞数与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；在第6～9浓度组及第13、14浓度组,穿膜细胞数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；相邻各实验组间仅10～12组与6、7、8、9、13、14组比较,差异有统计学意义(P<0.05),在10～12组间及6、7、8、9、13、14组间差异无统计学意义(P>0.05)；表明当药物达到一定浓度时对A549细胞侵袭模拟基底膜的能力有抑制作用。(8)选择不同浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞48小时后,在第7～10药物浓度组穿膜细胞数与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),在第6浓度组穿膜细胞数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；仅第7组与第8～10组比较差异有统计学意义(P<0.05),在第8、9、10浓度组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；表明当药物达到一定浓度时对细胞侵袭基底膜有抑制作用。(9)选择不同浓度的复方苦参注射液作用肺腺癌A549细胞72小时后,在第6、7浓度组穿膜细胞数与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),8～10浓度组穿膜细胞数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；相邻实验组第6、7组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；在第6、7浓度组分别与8～10浓度组间比较差异有统计学意义(P<0.05)；表明当药物作用于细胞达72小时后,仅在低浓度对细胞的侵袭性有抑制作用。
　　 结论:(1)复方苦参注射液可以抑制肺腺癌A549细胞的生长,其抑制强度跟其与细胞的作用时间和浓度有关；(2)复方苦参注射液对肺腺癌A549细胞生长的抑制作用机制不完全是通过抑制细胞Hpa的表达而实现；(3)肺腺癌A549细胞的侵袭、转移能力与Hpa在细胞内的表达有关。

目录

文摘

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前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

苦参抗肿瘤作用机制的研究进展(综述)

参考文献