白介素-10,白介素-17,白介素-22,白介素-23对人表皮黑素细胞生物活性的影响

摘要

目的：色素障碍性皮肤病主要病因为皮肤中黑素细胞(melanocyte,MC)异常,最终导致黑素生成异常所致,一般分为色素增加性疾病和色素减退性疾病两大类,最常见的疾病分别为黄褐斑和白癜风,两病发病率均较高,患者众多,且此类疾病易诊难治。本实验主要目的为研究色素障碍性皮肤病的发病机制为色素性疾病的治疗提供新的思路。方法:1、建立不添加霍乱毒素、十四烷酰法佛醋酸酯和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤等细胞毒性物质的正常人表皮黑素细胞培养体系;2、检测不同浓度IL-10, IL-17, IL-22, IL-23对黑素细胞增殖活性的影响(CCK-8法测定);3、检测不同浓度IL-10, IL-17, IL-22, IL-23对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响(L-DOPA法);4、流式细胞仪检测:不同浓度IL-10, IL-17, IL-22, IL-23对黑素细胞凋亡的影响,全部数据采用SPSS统计软件10.0版进行分析。结果：1、添加HMGS-2的Medium254培养基可获得大量纯化的黑素细胞。避免使用霍乱毒素、十四烷酰法佛醋酸酯、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤等细胞毒性物质。2、黑素细胞在 IL-10为50ng/ml浓度时增殖率随着培养时间的延长而升高。当培养24h、48h和72h后与对照组相比有极显著的统计学差异(P<0.01)。但随着IL-10浓度的升高其增殖率随着培养时间的延长反而有下降趋势。浓度为200ng/ml培养48h和72h后与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。3、IL-17随着培养时间的延长呈剂量依赖性抑制黑素细胞的增殖。当IL-17浓度为50ng/ml培养48h和72h后与对照组相比有统计学差异(P<0.05);IL-17浓度为100ng/ml和200ng/ml培养48h和72h后与对照组相比有极显著的统计学差异(P<0.01)。4、IL-22随着浓度的增加呈明显的时间依赖性抑制黑素细胞的增殖。当培养时间24h时只有浓度为200ng/ml与对照组相比有统计学差异(P<0.05);当培养时间为48h时IL-22浓度从50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml与对照组相比均有统计学差异(P<0.05);当培养时间为72h时所有浓度均抑制黑素细胞的增殖,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)浓度为100ng/ml和200ng/ml时与对照组相比有极显著的统计学差异(P<0.01)。5、IL-23随着浓度的增加呈时间依赖性抑制黑素细胞的增殖。当培养时间为24h时浓度为200ng/ml时与对照组相比有统计学差异(P<0.05);当培养时间为48h时浓度为100ng/ml和200ng/ml与对照组相比均有统计学差异(P<0.05);当培养时间为72h时浓度从50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml与对照组相比均有统计学差异(P<0.05);且浓度为200ng/ml时在培养48h和72h时与对照组相比均有极显著的统计学差异(P<0.01)。6、酪氨酸酶的活性检测在培养48h后黑素细胞在 IL-10为50ng/ml浓度时酪氨酸酶活性升高,较对照组有统计学差异(P<0.05)。IL-17和IL-22在浓度为50ng、100ng/ml、200ng/ml时抑制酪氨酸酶的活性,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。IL-23在浓度为100ng/ml和200ng/ml时抑制酪氨酸酶的活性,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)7、用含100ng/ml的IL-10, IL-17, IL-22, IL-23培养黑素细胞48小时后凋亡率分别为5.2％、32.1％、23.0％、23.0％,对照组为5.1％, IL-10与对照组相比无明显差异,IL-17, IL-22, IL-23培养黑素细胞的凋亡率与对照组相比有明显差异。结论：1、使用添加HMGS-2的Medium254培养基,同时采用分离酶Ⅱ消化法、两段法、胰蛋白酶差速消化法可去除角质形成细胞、成纤维细胞,并获得大量纯化的黑素细胞。2、IL-10的降低可能参与白癜风的发病,且IL-10的浓度影响黑素细胞的生长和酪氨酸酶的活性,纠正细胞因子的表达可能有利于白癜风的复色。3、高表达的IL-22可能导致黑素细胞处于一个相对紊乱的微环境中,引起黑素细胞的损伤,酪氨酸酶活性降低,从而导致黑素合成障碍引起色素脱失。4、IL-17和IL-23在高浓度时对体外培养的正常人黑素细胞的生长和酪氨酸酶的活性有抑制作用且随着培养时间的延长与对照组差异越大,黑素细胞凋亡率也较对照组明显升高提示IL-17和IL-23对黑素细胞有损伤作用但其作用机制还需进一步的试验和探讨。

目录

封面

目录

中文摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

实验结果

1.原代培养细胞

2 IL-10,IL-17,IL-22,IL-23对黑素细胞生物学影响的测定结果

讨 论

1 建立不添加TPA、CT、IBMX条件下黑素细胞培养体系

2 IL-10,IL-17,IL-22,IL-23对黑素细胞生物学影响

结论

参考文献

黄褐斑的治疗进展

1 局部外用药治疗

2 全身治疗

3 光学技术治疗

4 联合治疗

参考文献